Глава 1: Технология ПЦР
1.1 Принципы ПЦР
ПЦР (полимеразная цепная реакция) или полимеразная цепная реакция относится к ДНК-полимеразе катализируется родительской цепью ДНК в качестве шаблона, с специфический праймер для расширения начальной точки добавление dNTP, Mg2+ и факторы расширения, усиление усиления факторы. Через этапы денатурации, отжига и удлинения, Репликация дочерней цепи in vitro комплементарна шаблону ДНК родительской цепи, что позволяет быстро и специфически амплифицировать любую целевую ДНК in vitro.
1.2 Классификация ДНК-полимераз
ДНК-полимераза — это важный фермент для сотовый Репликация ДНК. Согласно термостабильности, способности к синтезу, скорости, точности и специфичность, ее можно классифицировать как Taq ДНК-полимеразу, высокоточную ДНК-полимеразу, ДНК-полимеразу с горячим стартом, ДНК-полимеразу прямого расширения, длиннофрагментированную ДНК-полимеразу фермент, быстрая ДНК-полимераза, множественная ДНК-полимераза и т. д..
Наиболее распространенной из них является ДНК-полимераза Taq, которая обладает полимеразной активностью на 5'→3' конце и экзонуклеазная активность на 5'→3' конце, но нет 3'→5' коррекционная активность конца. Наиболее важной особенностью Taq является его хорошая термостойкость, которая может выдерживать термическую денатурацию шаг ПЦР, что делает ненужным добавление фермента в середине процесса. Однако Taq имеет низкую точность, поскольку не имеет корректурной активности. Его точность в основном достигается за счет концентрации и соотношения ионов магния и dNTP.
Высокоточная ДНК-полимераза содержит центр полимеризации и центр расщепления, центр полимеризации имеет 5'→3' ДНК-полимеразную активность, которая может катализировать синтез ДНК вдоль направления 5'→3'; центр расщепления имеет 3'→5' экзонуклеазную активность, которая может осуществлять репарацию несовпадений оснований. Таким образом, в дополнение к характеристикам Taq ДНК-полимеразы, высокоточная ДНК-полимераза также имеет корректирующую активность, отвечающую за вырезание несоответствующий нуклеотидов, тем самым обеспечивая точность продукта.
На схеме выше показано, как работает ДНК-полимераза. [1].
Прямая ПЦР (Прямая ПЦР) — это реакция, которая использует неочищенные образцы для ПЦР-амплификации и животных или растительные ткани для прямой амплификации. В настоящее время, Йесен Наборы для прямой ПЦР можно использовать для ПЦР-амплификации сырых образцов, таких как растения, ткани животных, кровь и т. д. без необходимости очистки нуклеиновых кислот, что значительно упрощает процесс проведения ПЦР-экспериментов.
На рисунке выше показан метод прямой ПЦР.
А. Прямой метод: возьмите небольшое количество образца и добавьте его непосредственно в ПЦР. Мастер-микс для ПЦР-идентификации;
Б. Метод лизиса: После взятия образца добавьте его в лизирующий раствор для высвобождения генома, возьмите небольшое количество супернатанта лизирующего раствора и добавьте его в ПЦР-мастер-микс для ПЦР-идентификации.
1.3 Часто задаваемые вопросы и решения
| Беда | Причина | Решение |
| Без усиленных полос | Проблемы системы электрофореза | Устранение неполадок с красителем нуклеиновых кислот, концентрацией геля и буфером для электрофореза. |
| Неточная температура денатурации | Соответствует ли указанная температура прибора ПЦР фактической температуре? Если температура слишком высокая, фермент быстро в течение первых нескольких циклов; если оно слишком низкое, денатурация матрицы не завершена. | |
| Загрязнение протеазы и нуклеазы в реакционной системе | Перед добавлением фермента Taq реакционную систему следует нагреть до 95°C в течение 5–10 минут. | |
| Пошибка римера | Проверьте специфичность праймера или перепроектируйте праймеры с помощью BLAST. | |
| Шаблон содержит примеси | В частности, зафиксированные формальдегидом и залитые парафином ткани часто содержат муравьиную кислоту, вызывающую депуринизацию ДНК и влияющую на результаты ПЦР. | |
| Ухудшение состояния и выход из строя праймера | Убедитесь, что синтетические праймеры правильные, очищенные или инактивированные из-за неправильных условий хранения. | |
| Меньшее количество продукта ПЦР | Неподходящая температура отжига | Реакция градиентной ПЦР была разработана для оптимизации температуры отжига с градиентом 2 градуса. |
| Наличие ингибиторов в матрице ДНК | Убедитесь, что шаблон ДНК чистый. | |
| Длительная денатурация | Длительная денатурация приводит к инактивации ДНК-полимеразы. | |
| Слишком короткое расширение | Слишком короткое время расширения. Установите время расширения по принципу 1кб/мин. | |
| Количество ДНК-матрицы слишком мало | Увеличьте количество ДНК-матрицы. | |
| Недостаточное количество грунтовок | Увеличьте содержание праймера в системе. | |
| Недостаточное количество циклов ПЦР | Увеличьте количество циклов реакции. | |
| Несколько полос | Низкая специфичность праймера | Для проверки специфичности праймеров или их перепроектирования использовалось программное обеспечение для проектирования праймеров, такое как BLAST и Primer. |
| Чрезмерное количество петель | Увеличьте количество шаблонов соответствующим образом и уменьшите количество циклов. | |
| Экзогенное ДНК-загрязнение | Обеспечьте чистоту работы. | |
| Чрезмерное количество шаблонов | Количество плазмидной ДНК должно быть <50 нг, а геномной ДНК — <200 нг. | |
| Слишком много грунтовки | Уменьшите количество праймеров в реакционной системе. | |
| Реакционный раствор плохо перемешан | Убедитесь, что реакционный буфер полностью расплавлен и тщательно перемешан. | |
| Мг Высокая концентрация | Отрегулируйте концентрацию используемого Mg соответствующим образом. | |
| Высокая дозировка фермента или плохое качество фермента | Уменьшите количество фермента или замените его другим источником. | |
| Низкая температура отжига, длительное время отжига и удлинения | Увеличьте температуру отжига, чтобы сократить время денатурации и удлинения, или разработайте градиентную реакцию ПЦР для оптимизации температуры отжига. | |
| Проблемы с самой смесью ПЦР | Если это премикс для ПЦР, то причиной может быть качество самого реагента, рекомендуется сменить партию или другие марки. | |
| Неправильный размер | Снанесение | Очистите рабочий стол, используя новые реагенты и наконечники. |
| Неправильное использование шаблонов или праймеров | Замените праймеры и шаблоны. | |
| Гэнотип | На изученных генах был проведен анализ последовательности и исследования BLAST. |
Глава 2: Электрофорез нуклеиновых кислот
2.1 Принципы электрофореза нуклеиновых кислот
Электрофорезом называется движение заряженных частиц под действием электрического поля к электроду, противоположное их электрическим свойствам. Использование заряженных частиц в электрическом поле двигаться с разной скоростью и достигать разделения технологии называется электрофорез. Электрофорез нуклеиновых кислот является важный инструмент для исследования нуклеиновых кислот и является неотъемлемой частью таких методов, как зонды нуклеиновых кислот, амплификация нуклеиновых кислот и анализ последовательности. Электрофорез нуклеиновых кислот обычно выполненный в агарозе или полиакриламидные гели. Различные концентрации Агароза и полиакриламид могут образовывать гели с различными размерами ячеек молекулярного сита, которые можно использовать для разделения фрагментов нуклеиновых кислот с различной молекулярной массой.
2.2 Электрофорез в агарозном геле
Агароза — линейный полимер, извлекаемый из морских водорослей. Агарозу нагревают в буферном растворе и расплавляют в чистый, прозрачный золь, который затем выливают в желатиновую форму и застывает, образуя твердую матрицу, известную как гель, плотность которой зависит от концентрация агарозы.
Агароза гель-электрофорез — это разновидность метода электрофореза, использующая агарозу в качестве поддерживающей среды, и главное отличие между аналитический принцип и другие поддерживающие электрофорез заключается в том, что он имеет двойная роль «молекулярного сита» и «электрофореза». гель помещается в электрическое поле, под действие электрическое поле, заряженное нуклеиновые кислоты мигрируют в положительный полюс через сетка из гель. The скорость На миграцию влияет размер молекулы нуклеиновой кислоты, концентрация агарозы, приложенное напряжение, электрическое поле, буфер электрофореза и количество внедренного красителя. После соответствующего времени электрофорезасявляется под разные условияфрагменты нуклеиновых кислот с разными размерами и конформациями будут находиться в разных положениях на геле, тем самым достигая цели разделения.Разделение агарозного геля имеет широкий спектр применения, обычно используется при извлечении геля для резки ДНК, изоляции ДНК и используется для подтверждения того, является ли ДНК рекомбинантной, плазмида и т. д. Независимо от того, разрезана плазмида или нет, различные концентрации агарозного геля может быть отделена от длины 200бп к 50кб из ДНК фрагменты.
2.3 Экспериментальные методы
Изготовление клей
Возьмем в качестве примера концентрацию 1%: взвесьте 1 г агарозы, вылейте ее в коническую колбу объемом 250 мл, добавьте 100 мл буфера для электрофореза 0,5×TBE. и хорошо перемешайте, доведите до кипения в микроволновой печи, а затем высушите его на воздухе примерно до 60℃, добавьте соответствующее количество красителя нуклеиновой кислоты и хорошо встряхните, а затем вылейте его в чистую гелевую пластину, которая была заранее подготовлена, возьмите расческу обеими руками, чтобы вставьте в гелевый раствор вертикально и подождите гель быть охлаждают естественным путем до полного затвердевания (25-30 мин).
Удалить расческу для нанесения клея
Осторожно перенесите гель в емкость для электрофореза (либо вместе с поддоном для геля, либо только с гелем).), поместите сторону лунки с образцом в отрицательный полюс и добавьте 0,5× TBE Электрофорезный буфер до тех пор, пока гель не опустится примерно на 1 мм ниже.
Добавлять образец
Добавить 10× загрузочный буфер (загрузка буфер) к образцам ДНК, Хорошо перемешайте, а затем медленно добавьте смесь образца в субобъединенный гель скважины с помощью пипеточного пистолета, добавляя 5-10 мкл образца на лунку (не более 40 мкл). Как правило, первая лунка должна быть заполнена ДНК-маркером, вторая - положительным контролем (определенная ДНК), и третий с отрицательным контролем (реагент или вода)), и порядок отбора проб должен быть зафиксирован.
Электрофорез
Покройте электрофорезный бак, подключите провода, включите питание и установите напряжение электрофореза, ток и время параметры. Как правило, напряжение не должно превышать 5 В/см (длина относится к расстояние между положительным и отрицательным полюсами электрофорезной ванны), и время электрофореза обычно составляет 15-30 мин.
Конец электрофореза
Удалять гель (без поддона для геля) и сфотографируйте его с помощью системы УФ-визуализации, чтобы получить четкое электрофоретическое изображение, затем отредактируйте электрофоретическое изображение с программным обеспечением для редактирования изображений и укажите на этикетке информацию об образце, дату и оператора.
2.4 Часто задаваемые вопросы и решения
| Беда | Причина | Решение |
| Отсутствует целевая полоса | Маленькая ДНК выходит из геля | Сократите время электрофореза, уменьшите напряжение, увеличьте концентрацию геля. |
| Полосы ДНК с одинаковым размером молекулярной массы нелегко различить | Увеличьте время электрофореза до достижения оптимальной концентрации геля. | |
| Целевой фрагмент слишком велик для обычного электрофореза. | Анализ проведен методом импульсного гель-электрофореза. | |
| Клип без цели | Процесс ПЦР был неисправен и не привел к амплификации целевого продукта. | |
| Размытые полосы ДНК | Устаревший буфер для электрофореза | При многократном использовании буфера для электрофореза ионная сила снижается, значение pH повышается медленно, а промывающая способность ослабевает, что влияет на эффект электрофореза, поэтому рекомендуется часто менять буфер для электрофореза. |
| деградация ДНК | Избегайте загрязнения нуклеазой. | |
| Используемые условия электрофореза не подходят для электрофореза. | Напряжение электрофореза не должно превышать 20 В/см, а температура должна быть <30°C; температура электрофореза больших цепей ДНК должна быть <15°C; проверьте, имеет ли используемый буфер для электрофореза достаточную буферную емкость. | |
| Избыточный отбор проб ДНК | Уменьшите количество ДНК, измеренное в геле. | |
| Образцы ДНК слишком соленые | Избыток соли удаляли осаждением этанолом перед электрофорезом. | |
| белковое загрязнение | Экстракция фенолом перед электрофорезом удаляет белки. | |
| Концентрация образца слишком высокая | Концентрация верхнего образца должна быть менее 500 нг/лунку, слишком высокая концентрация повлияет на скорость электрофореза, его протекание, что приведет к перетаскиванию и размытию. | |
| Слабые или отсутствующие полосы | Недостаточный размер образца ДНК | Увеличение количества поглощенной ДНК |
| деградация ДНК | Предотвращение загрязнения ДНК нуклеазой | |
| Неподходящий источник света для красителей нуклеиновых кислот | Выберите источник света с соответствующей длиной волны в соответствии с инструкцией к красителю нуклеиновой кислоты. | |
| Полосы неразделенные | нехватка времени | Увеличить время электрофореза |
| Неправильная концентрация геля | Концентрация клея слишком высока, что приводит к слишком большому сопротивлению разделению. | |
| Концентрация ионов соли в образце слишком высока | Высокая концентрация ионов соли увеличивает электрофоретическое сопротивление и препятствует разделению полос, например, переваренных образцов, содержащих эндонуклеазный буфер. | |
| Неспецифические полосы | РНК-загрязнение | Повторная подготовка образцов |
| Загрязнение между образцами | Замена наконечника во время наполнения; предотвращение проливания образцов объемом >40 мкл. |
2.5 Электрофорез в полиакриламидном геле
Полиакриламидные гели образуются в результате химической реакции между мономером акриламида, катализаторами цепной полимеризации N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамином (TEMED) и персульфатом аммония, а также сшивающим агентом N,N'-метиленбисакриламидом. Мономер акриламида полимеризуется в присутствии катализатора с образованием длинных цепи, которые сшитый к сшивающий агент для образования геля, размер пор которого определяется длиной цепи и степенью сшивания. Размер пор определяется длиной цепи и степень сшивания. Длина цепи зависит от Концентрацию акриламида и степень сшивания полимера можно изменять, регулируя соотношение акриламида и сшивающего агента..
Электрофорез в полиакриламидном геле можно использовать для: отдельный образцы на основе различия в заряжать, молекулярный размер и форма электрофорезированные образцы. Он сочетает в себе молекулярное сито и электростатику. и имеет более высокую разрешающую способность, чем электрофорез в агарозном геле. фрагменты ДНК отличаясь только один нуклеотид можно разделить.
Электрофорез в полиакриламидном геле используется для анализа и подготовки фрагментов ДНК длиной менее 1 кб. В зависимости от размер фрагменты нуклеиновой кислоты, которые необходимо выделить, гели другой можно приготовить.
Эффективные диапазоны разделения для различных концентраций акриламида и ДНК показаны в таблице ниже:
| Конц. (%) | Эффективный диапазон разделения (bp) |
| 3.5 | 100-2000 |
| 5 | 80-500 |
| 8 | 60-400 |
| 12 | 40-200 |
| 15 | 25-150 |
| 20 | 10-100 |
2.4 Рекомендации по выбору сопутствующих товаров
Обычная ПЦР | ||||
| Спецификация | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Длина усиления | ≤10-15 кб | ≤5 кб | ≤5 кб | ≤4 кб |
| Время продления | 1-10 сек/кб | 30 сек/кб | 30 сек/кб | 30 сек/кб |
| Конечная структура продукта | 3'-дА | 3'-дА | 3'-дА | 3'-дА |
| Температура отжига | 60℃ | Tпл-(2~5)℃ | Tпл-(2~5)℃ | Tпл-(2~5)℃ |
| Диапазон совместимости ГХ | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| 5'-3' экзонуклеазная активность | Подарок | Подарок | Подарок | Подарок |
| ПЦР колоний | Подходящий | Подходящий | Подходящий | Подходящий |
| Идентификация генов | Подходящий | Подходящий | Подходящий | Подходящий |
| Мультиплексная ПЦР | Не подходит | Не подходит | Не подходит | 3-4 плексная ПЦР |
| Индикатор электрофореза | Пурпурно-красный | Синий | Бесцветный | Синий |
| Горячий старт | Горячий старт | Не горячий старт | Не горячий старт | Горячий старт |
| Премикс/комплект | Предварительная смесь | Предварительная смесь | Предварительная смесь | Предварительная смесь |
Прямая ПЦР | ||||
| Спецификация | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Тип продукта | Прямое усиление мыши | Прямое усиление крови | Растительная прямая амплификация | |
| Длина усиления | ≤1 кб | ≤8 кб | ≤1 кб | |
| Время продления | 30 с/кб | 3-5 с/кб для ≤2 кб, | 60 с/кб | |
| 10 с/кб для ≤8 кб | ||||
| Время лизиса образца | 15 мин. | 0-3 мин. | 0-10 мин | |
| Конечная структура продукта | Тупой конец | Тупой конец | Тупой конец | |
| Температура отжига | Тм-(2~5)℃ | Тм-(1~2)℃ | Тм-(2~5)℃ | |
| Диапазон совместимости ГХ | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| 5'-3' экзонуклеазная активность | √ | √ | √ | |
| Идентификация генов | √ | √ | √ | |
| Мультиплексная ПЦР | 3-4 плекса | |||
| Прямое усиление образца | √ | √ | √ | |
| Индикатор электрофореза | Синий | Бесцветный | Синий | |
| Горячий старт | √ | √ | √ | |
| Премикс/комплект | Комплект (с миксом) | Комплект (со смесью и буфером) | Комплект (с миксом) | |
| Подходящие организмы | Мышь, Крыса | Человек, Мышь, Коза, Курица, Свинья и т. д. | Рис, кукуруза, табак, рапс, пшеница, соя и т. д. | |
| Подходящая ткань/материал | Хвост, ухо, палец ноги (с мышцами) и другие органы | Свежая кровь с ЭДТА, гепарином, цитратом и т. д., охлажденная (замороженная) кровь, коммерческие сухие капли крови | Молодые листья, старые листья, рассада, молодые стебли | |
| Образец ввода | Ткань: 5-10 мг; Хвост: 1-5 мм | Цельная кровь: 0,5%-20%, Сухое пятно крови: 1 мм² | Лист: 1-10 мм, Семя: 1-3 мм | |
Высокоточная ПЦР | ||||
| Спецификация | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Длина усиления | ≤10 кб гДНК, ≤10 кб кДНК, ≤16 кб λДНК | ≤10 кб гДНК, ≤10 кб кДНК, ≤13 кб λДНК | ≤10 кб гДНК, ≤10 кб кДНК, ≤13 кб λДНК | |
| Время продления | 5 сек/кб | 30 сек/кб | 30 сек/кб | |
| Верность (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Конечная структура продукта | Тупой конец | Тупой конец | Тупой конец | |
| Температура отжига | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| Диапазон совместимости ГХ | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| 5'-3' экзонуклеазная активность | Отсутствующий | Отсутствующий | Отсутствующий | |
| Индикатор электрофореза | Синий | Бесцветный | Синий | |
| Отдельный фермент/премикс | Предварительная смесь | Одиночный фермент | Предварительная смесь | |
| толерантность | / | / | Кровь, лизат мышиной ткани | |
Электрофорез нуклеиновых кислот | ||||
| Категория продукта | Номер кат. | Название продукта | Приложение | |
| Агароза | 10208ES | Агароза | Рутинный электрофорез нуклеиновых кислот | |
| 10221ES | Агароза с высоким содержанием сит (класс ПЦР) | Подходит для разделения фрагментов ДНК размером 20–800 п.н., сопоставимо с полиакриламидным гелем. | ||
| 10226ES | Таблетки агарозы (0.5 г/таблетка) | Удобен для рутинных применений агарозы | ||
| Краситель нуклеиновых кислот | 10202ES | Окрашивание геля нуклеиновой кислоты YeaRed (10 000× в воде) | Растворим в воде, спектральные свойства аналогичны свойствам ЭБ, возбуждается УФ-излучением 300 нм. | |
| ДНК-маркер | 10510ES | GoldBand 1 кб ДНК-лестница | 250-12000 п.н. (13 полос) | |
| 10515ES | ДНК-лестница GoldBand 50 п.н. | 50-1000 п.н. (14 полос) | ||
| 10507ES | ДНК-лестница GoldBand 100bp | 100-1500 п.н. (12 полос) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 п.н. плюс ДНК-лестница | 100-3000 п.н. (14 полос) | ||
| 10517ES | ДНК-лестница GoldBand 200 п.н. | 200-5000 п.н. (12 полос) | ||
| 10518ES | ДНК-лестница GoldBand 500 п.н. | 500-5000 п.н. (8 полос) | ||
| 10501ES | ДНК-маркер GoldBand DL2000 | 100-2000 п.н. (6 полос) | ||
| 10504ES | ДНК-маркер GoldBand DL5000 | 100-5000 п.н. (9 полос) | ||
| 10505ES | ДНК-маркер GoldBand DL10,000 | 100-10000 п.н. (10 полос) | ||
| 10511ES | Полномасштабная ДНК-лестница GoldBand | 100-12000 п.н. (20 полос) | ||
| 10512ES | ДНК-маркер GoldBand DL15000 | 250-15000 п.н. (7 полос) |
2.5 Публикации с использованием продуктов электрофореза нуклеиновых кислот (Pискусственный)
[1] Ло Дж, Ян Q, Zhang X и др. TFPI — это рецептор толстой кишки для TcdB из гипервирулентного клада 2 C. dfficile. Ячейка 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Хуан Н., Чен Х., Гонг Х. и др. SeHed, новая система экспрессии генов с перекисью водорода, вызванной стрессом свойство устранения ide и эффект против старения. Передача сигнала и целевая терапия. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (IF: 38.1)
[3] Чжан С., Чжоу Б., Гу Ф. и др. Ингибирование микропептида PACMP вызывает синтетические летальные эффекты за счет уменьшения CtIP и поли(АДФ-рибозил) ион. mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (ЕСЛИ:17.970)
[4] Чжу М., ДайИкс. Подавление роста из-за измененных уровней (p)ppGpp является результатом неоптимального распределение ресурсов в Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Ризван Х.М., Жимин Л., Харсоновати В. и др. Идентификация грибковых патогенов для контроля послеуборочной обработки Разложение маракуйи (Passiflora edulis) и сравнительный анализ путей мультиомики раскрывают Фиолетовый цвет более устойчив nt к патогенам, чем желтый сорт. j Fungi (Базель). 2021;7(10):879. Опубликовано 19 октября 2021 г. doi:10.3390/jof 7100879 (ЕСЛИ:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z и др. Структурная характеристика Нейтрализация нанотела с широкой активностью против Варианты SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Опубликовано 2 июня 2022 г. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF:5.640)
[7] Ван Т., Рен Д., Го Х. и др. CgSCD1 необходим для биосинтеза меланина и патогенности из Colletotrichum gloeosporioides. pathogens. 2020;9(2) :141. опубликовано 20 февраля 2020 г. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Опубликовано 20 февраля 2020 г. doi:10.3390/патогены9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Профили экспрессии CircRNA у чувствительных и устойчивых к дельтаметрину
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Комп Биохим Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Ху М., ДайИкс. Подавление роста измененным (p) ppGpp уровни являются результатом неоптимального распределения ресурсов в Escherichia coli[J].Исследования нуклеиновых кислот, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Го Л., Ян В., Хуан К. и др. Масс-спектрометрия, специфичная к селеноцистеину, выявляет селенопротеомы, специфичные для тканей, и селенопротеины-кандидаты [J]. Химия клеток биология, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Публикации с использованием продуктов ПЦР (частичные)
[1] Ван И, Фу З, ЛиКс, эт ал. Цитоплазматический ДНК-сенсорика к КУ сложный в в возрасте CD4+ Т клетка потенцирует Т клетка актива ция и связанный со старением аутоиммунный воспаление. Иммунитет. 2021;54(4):632-647.e9. дои:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Ян Икс, Гао Ф, Чжан В, эт ал. "Звезда" миР-34а и CXCR4 антагонист основанный на наноплекс для бинарныйу кооперативный миграционная обработка противт метастатический грудь рак. Дж. Контроль Выпуск. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] ЦяоЙ, Ду Дж, Ge Р, эт ал. А Образец и Обнаружение Микроигла Пластырь для Псориаз МикроРНК Биомаркер
Анализ в Интерстициальный Жидкость. Анал. Химия 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Лин Q,Ye X, Хуан З, эт ал. Графен На основе оксида Подавление из Неспецифичность в Опосредованный петлей Изотер malAmplfication Включение чувствительного Обнаружение Циклооксигеназы-2 мРНК в Колоректальный Рак. Анальный Химия. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Лин В, Хуан З,Йе Х, эт ал. Лаборатория в а трубка: Изоляция, извлечение, и являетсятермальный усиление обнаружение из экзосомальный длинный некодирование РНК желудочного рак. Таланта. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Лю С, Цзоу Г, эт др. 5-Формилурацил как а Мультифункциональный Здание Блокировать в Биосенсор Дизайны[J].Angew Хим Инт Эд Английский 2018 26 июля;57(31):9689-9693.（IF 11.992)
[7] Ван М, Чжан С, Чжэн Г, эт ал. Приобретение функции Мутироватьион из Card14 Приводит к Спонтанный Псориазоподобный Кожа Воспаление через Улучшенный Кератиноцит Ответ на Ил-17А. Иммунитет. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(ЕСЛИ:19.734)
[8] Чжан И, Дин H, Ван X, эт ал. МК2 продвигает Tfcp2l1 деградация с помощью β-ТрКП убиквитин лигаза к регулировать мышь эмбриональный стебель самообновление клеток. Клетка Отчет 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (IF:9.423)
[9] Лин Q,Ye X,Yang Б, эт ал. В режиме реального времени флуоресценция петлевой опосредованный изотермический усилительныйation анализ для стремительный и чувствительный обнаружение стрептококка галлолитический подвид. галлолитикус связанный с колоректальный рак[J].
Аналитический и биоаналитический химия, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Лин Q,Ye X, Хуан З, эт ал. Графен На основе оксида Подавление из Неспецифичность в Опосредованный петлей Изотер malAmplfication Включение чувствительного Обнаружение Циклооксигеназы-2 мРНК в Цветктал Рак[J].Аналити кал химия, 2019.（IF6.35）
Цитата:
[1] Л. А. Леб, Р. Мл. ДНК-полимеразы и болезни человека [J]. Nature Reviews Genetics.