Chương 1: Công nghệ PCR
1.1 Nguyên lý của PCR
PCR (Phản ứng chuỗi polymerase), hay phản ứng chuỗi polymerase, đề cập đến DNA polymerase được xúc tác bởi sợi DNA mẹ làm khuôn mẫu, với một mồi đặc hiệu để mở rộng điểm khởi đầu, việc bổ sung dNTP, Mg2+ Và hệ số mở rộng, tăng cường khuếch đại các yếu tố. Thông qua các bước biến tính, ủ và kéo dài, Sự sao chép trong ống nghiệm của sợi con bổ sung cho sợi DNA khuôn mẫu của sợi cha, có thể khuếch đại nhanh chóng và đặc hiệu bất kỳ DNA mục tiêu nào trong ống nghiệm.
1.2 Phân loại DNA polymerase
DNA pol là một enzim quan trọng cho di động sao chép DNA. Theo độ ổn định nhiệt, khả năng tổng hợp, tốc độ, độ trung thực và tính đặc thù, nó có thể được phân loại là Taq DNA polymerase, DNA polymerase độ trung thực cao, DNA polymerase khởi động nóng, DNA polymerase mở rộng trực tiếp, DNA polymerase phân mảnh dài enzyme, DNA polymerase nhanh, DNA polymerase đa, v.v..
Phổ biến nhất trong số này là Taq DNA polymerase, có hoạt động polymerase ở đầu 5'→3' và hoạt động exonuclease ở đầu 5'→3', nhưng không Hoạt động hiệu chỉnh cuối 3'→5'. Đặc điểm quan trọng nhất của Taq là khả năng chịu nhiệt tốt, có thể chịu được biến tính nhiệt bước chân của PCR, do đó không cần thiết phải thêm enzyme vào giữa quá trình. Tuy nhiên, Taq có độ trung thực thấp vì nó không có hoạt động hiệu đính. Độ trung thực của nó chủ yếu đạt được bằng nồng độ và tỷ lệ ion magie và dNTP.
DNA polymerase có độ trung thực cao chứa một trung tâm trùng hợp và một trung tâm cắt, trung tâm trùng hợp có hoạt tính DNA polymerase 5'→3', có thể xúc tác sự tổng hợp ADN theo hướng 5'→3'; trung tâm cắt có hoạt động exonuclease 3'→5', có thể thực hiện sửa chữa các sai lệch cơ sở. Do đó, ngoài các đặc điểm của Taq DNA polymerase, DNA polymerase độ trung thực cao còn có hoạt động hiệu chỉnh, chịu trách nhiệm cho cắt bỏ sự không phù hợp nucleotide, do đó đảm bảo độ chính xác của sản phẩm.
Sơ đồ trên cho thấy cách hoạt động của DNA polymerase [1].
PCR trực tiếp (PCR trực tiếp) là một phản ứng đó sử dụng các mẫu chưa tinh khiết để khuếch đại PCR và động vật hoặc mô thực vật để khuếch đại trực tiếp. Hiện nay,
Hình trên cho thấy kỹ thuật PCR trực tiếp.
MỘT. Phương pháp trực tiếp: lấy một lượng nhỏ mẫu và thêm trực tiếp vào PCR Master Mix để nhận dạng PCR;
B. Phương pháp phân giải: sau khi lấy mẫu, thêm mẫu vào dung dịch ly giải để giải phóng bộ gen, lấy một lượng nhỏ dịch ly giải và thêm vào PCR Master Mix để định danh PCR.
1.3 Các câu hỏi thường gặp và giải pháp
| Rắc rối | Lý do | Giải pháp |
| Không có dải tần số khuếch đại | Các vấn đề về hệ thống điện di | Xử lý sự cố thuốc nhuộm axit nucleic, nồng độ gel và đệm điện di. |
| Nhiệt độ biến tính không chính xác | Nhiệt độ chỉ định của dụng cụ PCR có phù hợp với nhiệt độ thực tế không? Nếu nhiệt độ quá cao, enzyme sẽ nhanh chóng trong vài chu kỳ đầu tiên; nếu quá thấp, quá trình biến tính khuôn mẫu sẽ không hoàn tất. | |
| Sự nhiễm bẩn của protease và nuclease trong hệ thống phản ứng | Hệ thống phản ứng phải được đun nóng ở 95°C trong 5-10 phút trước khi thêm enzyme Taq. | |
| Plỗi rimer | Kiểm tra tính đặc hiệu của mồi hoặc thiết kế lại mồi bằng BLAST. | |
| Mẫu có chứa tạp chất | Đặc biệt, các mô cố định bằng formaldehyde và nhúng parafin thường chứa axit formic, gây ra hiện tượng khử purin DNA và ảnh hưởng đến kết quả PCR. | |
| Sự suy thoái và hỏng hóc của lớp sơn lót | Xác nhận rằng các chất mồi tổng hợp là chính xác, tinh khiết hay bị bất hoạt do điều kiện bảo quản không phù hợp. | |
| Lượng sản phẩm PCR ít hơn | Nhiệt độ ủ không phù hợp | Phản ứng PCR gradient được thiết kế để tối ưu hóa nhiệt độ gắn kết với gradient 2 độ. |
| Sự hiện diện của chất ức chế trong khuôn mẫu DNA | Đảm bảo mẫu DNA sạch. | |
| Biến tính kéo dài | Sự biến tính kéo dài dẫn đến sự bất hoạt của DNA polymerase. | |
| Phần mở rộng quá ngắn | Thời gian gia hạn quá ngắn. Đặt thời gian gia hạn theo nguyên tắc 1kb/phút. | |
| Lượng mẫu DNA quá thấp | Tăng lượng mẫu DNA. | |
| Số lượng mồi không đủ | Tăng hàm lượng mồi trong hệ thống. | |
| Số chu kỳ PCR không đủ | Tăng số chu kỳ phản ứng. | |
| Nhiều băng tần | Độ đặc hiệu mồi kém | Phần mềm thiết kế mồi như BLAST và Primer được sử dụng để kiểm tra tính đặc hiệu của mồi hoặc thiết kế lại mồi. |
| Số vòng lặp quá nhiều | Tăng lượng mẫu một cách thích hợp và giảm số chu kỳ. | |
| Nhiễm bẩn DNA ngoại sinh | Đảm bảo hoạt động sạch sẽ. | |
| Số lượng mẫu quá nhiều | Lượng DNA plasmid phải <50ng, trong khi DNA bộ gen phải <200ng. | |
| Quá nhiều mồi | Giảm lượng mồi trong hệ thống phản ứng. | |
| Dung dịch phản ứng không được trộn đều | Đảm bảo dung dịch đệm phản ứng đã tan chảy hoàn toàn và được trộn đều. | |
| Mg Nồng độ cao | Điều chỉnh nồng độ Mg sử dụng một cách thích hợp. | |
| Liều lượng enzyme cao hoặc chất lượng enzyme kém | Giảm lượng enzyme hoặc thay thế bằng nguồn khác. | |
| Nhiệt độ ủ thấp, thời gian ủ và kéo dài lâu | Tăng nhiệt độ gắn kết để giảm thời gian biến tính và kéo dài, hoặc thiết kế phản ứng PCR gradient để tối ưu hóa nhiệt độ gắn kết. | |
| Các vấn đề với bản thân hỗn hợp PCR | Nếu là premix PCR, có thể là do chất lượng của thuốc thử, nên thay đổi lô hoặc nhãn hiệu khác. | |
| Kích thước không đúng | Csự ô nhiễm | Làm sạch bàn bằng thuốc thử và đầu tip mới. |
| Sử dụng mẫu hoặc bản vẽ không đúng cách | Thay thế các lớp lót và khuôn mẫu. | |
| Gmẫu vật | Phân tích trình tự và nghiên cứu BLAST đã được thực hiện trên các gen được nghiên cứu. |
Chương 2: Điện di axit nucleic
2.1 Nguyên lý điện di axit nucleic
Sự di chuyển của các hạt tích điện dưới tác động của một điện trường hướng tới một điện cực ngược với tính chất điện của chúng được gọi là Điện di. Sử dụng các hạt tích điện trong điện trường di chuyển ở các tốc độ khác nhau và đạt được sự tách biệt của công nghệ được gọi là điện di. Điện di axit nucleic là một công cụ quan trọng cho nghiên cứu axit nucleic và là một một phần không thể thiếu của các kỹ thuật như đầu dò axit nucleic, khuếch đại axit nucleic và phân tích trình tự. Điện di axit nucleic thường là đã tiến hành trong agarose hoặc gel polyacrylamide. Nồng độ khác nhau của agarose và polyacrylamide có thể tạo thành gel với các kích thước lưới sàng phân tử khác nhau, có thể được sử dụng để tách các mảnh axit nucleic có trọng lượng phân tử khác nhau.
2.2 Điện di gel agarose
Agarose là một loại polymer tuyến tính được chiết xuất từ rong biển. Agarose được đun nóng trong dung dịch đệm và tan chảy thành một dung dịch trong suốt, sau đó được đổ vào vào khuôn gelatin và đông lại để tạo thành một chất nền rắn được gọi là gel, mật độ của nó phụ thuộc vào nồng độ agarose.
Agarose điện di gel là một loại phương pháp điện di sử dụng agarose làm môi trường hỗ trợ và sự khác biệt chính giữa phân tích nguyên tắc và hỗ trợ khác của điện di là nó có vai trò kép của "rây phân tử" và "điện di". gel được đặt trong trường điện, dưới hành động của trường điện, tích điện axit nucleic di chuyển đến tích cực cực bởi vì lưới của cái gel. Các tỷ lệ di cư bị ảnh hưởng bởi kích thước của phân tử axit nucleic, nồng độ agarose, điện áp được áp dụng, trường điện, đệm điện di và lượng thuốc nhuộm được nhúng. Sau thời gian điện di thích hợpSlà dưới điều kiện khác nhaucác mảnh axit nucleic có kích thước và cấu hình khác nhau sẽ ở các vị trí khác nhau trên gel, do đó đạt được mục đích phân tách.Sự tách gel agarose có phạm vi rộng, thường được sử dụng trong phục hồi gel cắt DNA, phân lập DNA và được sử dụng để hỗ trợ xem DNA có tái tổ hợp hay không, plasmid, v.v. Cho dù plasmid có bị cắt hay không, nồng độ gel agarose khác nhau có thể tách ra khỏi chiều dài của 200bp ĐẾN 50kb của ADN những mảnh vỡ.
2.3 Phương pháp thực nghiệm
Làm keo dán
Lấy nồng độ 1% làm ví dụ: cân 1 g agarose, đổ vào bình nón 250 ml, thêm 100 ml dung dịch đệm điện di TBE 0,5× và trộn đều, đun sôi trong lò vi sóng và sau đó hong khô bằng không khí đến khoảng 60℃, thêm một lượng thuốc nhuộm axit nucleic thích hợp và lắc đều, sau đó đổ vào một tấm gel sạch đã chuẩn bị sẵn, dùng lược chải bằng cả hai tay chèn vào dung dịch gel theo chiều dọc và chờ gel để được làm nguội tự nhiên cho đến khi đông cứng hoàn toàn (25-30 phút).
Tháo lược chải keo
Cẩn thận chuyển gel vào bể điện di (có khay gel hoặc chỉ có gel)), đặt mặt giếng mẫu vào cực âm và thêm 0,5× TBE đệm điện di cho đến khi gel ở độ sâu khoảng 1 mm.
Thêm vào vật mẫu
Thêm 10× bộ đệm tải (loading đệm) đến các mẫu DNA, trộn đều, sau đó từ từ thêm hỗn hợp mẫu vào subgel đã hợp nhất giếng với một khẩu súng nhỏ giọt, thêm 5-10 μL mẫu vào mỗi giếng (không quá 40 μL). Nhìn chung, giếng đầu tiên phải được lấp đầy bằng dấu hiệu DNA, giếng thứ hai bằng đối chứng dương tính (DNA được xác định), Và thứ ba với đối chứng âm tính (thuốc thử hoặc nước), Và thứ tự của các mẫu phải được ghi lại.
Điện di
Che phủ bể điện di, kết nối dây điện, bật nguồn và cài đặt điện áp, dòng điện điện di và thời gian các thông số. Nói chung, điện áp không được vượt quá 5 v/cm (chiều dài đề cập đến khoảng cách giữa cực dương và cực âm của bể điện di), Và thời gian điện di thường là 15-30 phút.
Kết thúc điện di
Di dời cái gel (không có khay gel) và chụp ảnh dưới hệ thống chụp ảnh UV để có được hình ảnh điện di rõ nét, sau đó chỉnh sửa hình ảnh điện di với phần mềm chỉnh sửa hình ảnh và dán nhãn thông tin mẫu, ngày tháng và người vận hành.
2.4 Các câu hỏi thường gặp và giải pháp
| Rắc rối | Lý do | Giải pháp |
| Thiếu dải mục tiêu | DNA nhỏ hết gel | Rút ngắn thời gian điện di, giảm điện thế, tăng nồng độ gel. |
| Các dải DNA có kích thước trọng lượng phân tử tương tự không dễ phân biệt | Tăng thời gian điện di để đạt được nồng độ gel tối ưu. | |
| Mảnh mục tiêu quá lớn để thực hiện điện di thông thường. | Phân tích trên điện di gel xung. | |
| Không có mục đích Clip | Quá trình PCR bị lỗi và không khuếch đại được sản phẩm mục tiêu. | |
| Dải DNA mờ | Đệm điện di cũ | Khi sử dụng đệm điện di nhiều lần, cường độ ion sẽ giảm, giá trị PH tăng chậm, khả năng rửa yếu đi, ảnh hưởng đến hiệu quả điện di, do đó nên thay đệm điện di thường xuyên. |
| Sự thoái hóa DNA | Tránh nhiễm bẩn nuclease. | |
| Các điều kiện điện di được sử dụng không phù hợp cho điện di | điện áp điện di không được vượt quá 20V/cm và nhiệt độ phải <30°C; nhiệt độ điện di các sợi DNA lớn phải <15°C; kiểm tra xem đệm điện di sử dụng có đủ khả năng đệm hay không. | |
| Lấy mẫu DNA quá mức | Giảm lượng DNA được lấy mẫu trong gel. | |
| Mẫu DNA quá mặn | Muối dư được loại bỏ bằng cách kết tủa bằng etanol trước khi điện di. | |
| ô nhiễm protein | Chiết xuất phenol trước khi điện di sẽ loại bỏ protein. | |
| Nồng độ mẫu quá cao | Nồng độ mẫu trên phải nhỏ hơn 500ng/giếng, nồng độ quá cao sẽ ảnh hưởng đến tốc độ điện di, chạy, dẫn đến hiện tượng kéo lê, nhòe. | |
| Dải yếu hoặc không có | Kích thước mẫu DNA không đủ | Tăng lượng hấp thụ DNA |
| Sự thoái hóa DNA | Tránh nhiễm bẩn nuclease của DNA | |
| Nguồn sáng không phù hợp cho thuốc nhuộm axit nucleic | Chọn nguồn sáng có bước sóng thích hợp theo hướng dẫn về thuốc nhuộm axit nucleic. | |
| Các dải không tách rời | thiếu thời gian | Tăng thời gian điện di |
| Nồng độ gel không chính xác | Nồng độ keo quá cao, dẫn đến khả năng tách keo quá lớn. | |
| Nồng độ ion muối trong mẫu quá cao | Nồng độ ion muối cao làm tăng khả năng chống điện di và ngăn cản sự tách các dải, ví dụ, mẫu tiêu hóa có chứa đệm endonuclease. | |
| Các dải không cụ thể | Nhiễm bẩn RNA | Chuẩn bị lại mẫu |
| Sự nhiễm bẩn giữa các mẫu | Thay thế đầu tip trong quá trình nạp; tránh làm đổ mẫu có thể tích >40 μl. |
2.5 Điện di gel polyacrylamide
Gel polyacrylamide được hình thành bởi phản ứng hóa học giữa monome acrylamide, chất xúc tác trùng hợp chuỗi N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (TEMED) và ammonium persulphate, và chất liên kết ngang N,N'-methylenebisacrylamide. Monome acrylamide trùng hợp khi có chất xúc tác để tạo thành chuỗi dài chuỗi, đó là liên kết chéo qua một tác nhân liên kết chéo để tạo thành gel, kích thước lỗ chân lông được xác định bởi chiều dài chuỗi và mức độ liên kết chéo. Kích thước lỗ chân lông được xác định bởi chiều dài chuỗi và mức độ liên kết chéo. Chiều dài chuỗi phụ thuộc vào nồng độ acrylamide và mức độ liên kết ngang của polyme có thể thay đổi bằng cách điều chỉnh tỷ lệ acrylamide với tác nhân liên kết ngang.
Điện di gel polyacrylamide có thể được sử dụng để chia mẫu dựa trên sự khác biệt trong thù lao, kích thước phân tử và hình dạng của các mẫu điện di. Nó kết hợp sàng lọc phân tử và tĩnh điện và có độ phân giải cao hơn so với điện di trên gel agarose. Các mảnh DNA chỉ khác nhau bởi một nucleotide có thể tách ra.
Điện di gel polyacrylamide được sử dụng để phân tích và chuẩn bị các đoạn DNA có chiều dài dưới 1 kb. Tùy thuộc vào kích thước của các mảnh axit nucleic cần được phân lập, gel của khác biệt có thể được chuẩn bị.
Phạm vi phân tách hiệu quả cho các nồng độ acrylamide và DNA khác nhau được thể hiện trong bảng dưới đây:
| Tóm lại (%) | Khoảng cách tách hiệu quả (bp) |
| 3,5 | 100 đến 2000 |
| 5 | 80 đến 500 |
| 8 | 60 đến 400 |
| 12 | 40 đến 200 |
| 15 | 25 đến 150 |
| 20 | 10 đến 100 |
2.4 Hướng dẫn lựa chọn sản phẩm liên quan
PCR thông thường | ||||
| Đặc điểm kỹ thuật | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Độ dài khuếch đại | ≤10-15 kb | ≤5kb | ≤5kb | ≤4kb |
| Thời gian gia hạn | 1-10 giây/kb | 30 giây/kb | 30 giây/kb | 30 giây/kb |
| Cấu trúc cuối sản phẩm | 3'-ngày | 3'-ngày | 3'-ngày | 3'-ngày |
| Nhiệt độ ủ | 60℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Phạm vi tương thích GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| Hoạt động của exonuclease 5'-3' | Hiện tại | Hiện tại | Hiện tại | Hiện tại |
| PCR khuẩn lạc | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp |
| Nhận dạng gen | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp |
| PCR đa mồi | Không phù hợp | Không phù hợp | Không phù hợp | PCR 3-4 plex |
| Chỉ số điện di | Màu đỏ tím | Màu xanh da trời | Không màu | Màu xanh da trời |
| Khởi động nóng | Khởi động nóng | Khởi đầu không nóng | Khởi đầu không nóng | Khởi động nóng |
| Trộn sẵn/Bộ dụng cụ | Trộn trước | Trộn trước | Trộn trước | Trộn trước |
PCR trực tiếp | ||||
| Đặc điểm kỹ thuật | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Loại sản phẩm | Sự khuếch đại trực tiếp của chuột | Sự khuếch đại trực tiếp máu | Khuếch đại trực tiếp thực vật | |
| Độ dài khuếch đại | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb | |
| Thời gian gia hạn | 30 giây/kb | 3-5 s/kb cho ≤2 kb, | 60 giây/kb | |
| 10 s/kb cho ≤8 kb | ||||
| Thời gian phân hủy mẫu | 15 phút | 0-3 phút | 0-10 phút | |
| Cấu trúc cuối sản phẩm | Đầu cùn | Đầu cùn | Đầu cùn | |
| Nhiệt độ ủ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| Phạm vi tương thích GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| Hoạt động của exonuclease 5'-3' | √ | √ | √ | |
| Nhận dạng gen | √ | √ | √ | |
| PCR đa mồi | 3-4 căn hộ | |||
| Khuếch đại mẫu trực tiếp | √ | √ | √ | |
| Chỉ số điện di | Màu xanh da trời | Không màu | Màu xanh da trời | |
| Khởi động nóng | √ | √ | √ | |
| Trộn sẵn/Bộ dụng cụ | Bộ sản phẩm (có Mix) | Bộ sản phẩm (có Mix + Buffer) | Bộ sản phẩm (có Mix) | |
| Sinh vật thích hợp | Chuột, Chuột cống | Người, Chuột, Dê, Gà, Lợn, v.v. | Gạo, ngô, thuốc lá, hạt cải dầu, lúa mì, đậu nành, v.v. | |
| Vải/Vật liệu phù hợp | Đuôi, tai, ngón chân (có cơ) và các cơ quan khác | Máu tươi có EDTA, Heparin, Citrate, v.v., máu đông lạnh, các đốm máu khô thương mại | Lá non, lá già, cây con, thân non | |
| Mẫu đầu vào | Mô: 5-10 mg; Đuôi: 1-5 mm | Máu toàn phần: 0,5%-20%, vết máu khô: 1 mm² | Lá: 1-10 mm, Hạt: 1-3 mm | |
PCR độ trung thực cao | ||||
| Đặc điểm kỹ thuật | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Độ dài khuếch đại | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | |
| Thời gian gia hạn | 5 giây/kb | 30 giây/kb | 30 giây/kb | |
| Độ trung thực (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Cấu trúc cuối sản phẩm | Đầu cùn | Đầu cùn | Đầu cùn | |
| Nhiệt độ ủ | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| Phạm vi tương thích GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| Hoạt động của exonuclease 5'-3' | Vắng mặt | Vắng mặt | Vắng mặt | |
| Chỉ số điện di | Màu xanh da trời | Không màu | Màu xanh da trời | |
| Enzyme đơn/Hỗn hợp trước | Trộn trước | Enzym đơn | Trộn trước | |
| Sức chịu đựng | / | / | Máu, dịch ly giải mô chuột | |
Điện di axit nucleic | ||||
| Danh mục sản phẩm | Mèo số | Tên sản phẩm | Ứng dụng | |
| Agarose | 10208ES | Agarose | Điện di axit nucleic thường quy | |
| 10221ES | Agarose sàng lọc cao (Cấp PCR) | Thích hợp để tách các đoạn DNA có kích thước 20 bp-800 bp, tương đương với gel polyacrylamide | ||
| 10226ES | Viên nén Agarose (0.5 g/viên) | Thuận tiện cho các ứng dụng agarose thông thường | ||
| Thuốc nhuộm axit nucleic | 10202ES | Gel nhuộm axit nucleic YeaRed (10.000 lần trong nước) | Tan trong nước, có tính chất quang phổ tương tự như EB, dễ bị kích thích ở tia UV 300 nm | |
| Dấu hiệu DNA | 10510ES | Thang DNA GoldBand 1 kb | 250-12000 bp (13 dải) | |
| 10515ES | Thang DNA GoldBand 50 bp | 50-1000 bp (14 dải) | ||
| 10507ES | Thang DNA GoldBand 100bp | 100-1500 bp (12 dải) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp cộng với DNA Ladder | 100-3000 bp (14 dải) | ||
| 10517ES | Thang DNA GoldBand 200 bp | 200-5000 bp (12 dải) | ||
| 10518ES | Thang DNA GoldBand 500 bp | 500-5000 bp (8 dải) | ||
| 10501ES | Máy đánh dấu DNA GoldBand DL2000 | 100-2000 bp (6 dải) | ||
| 10504ES | Máy đánh dấu DNA GoldBand DL5000 | 100-5000 bp (9 dải) | ||
| 10505ES | Máy đánh dấu DNA GoldBand DL10.000 | 100-10000 bp (10 dải) | ||
| 10511ES | Thang DNA toàn diện GoldBand | 100-12000 bp (20 dải) | ||
| 10512ES | Máy đánh dấu DNA GoldBand DL15000 | 250-15000 bp (7 dải) |
2.5 Ấn phẩm sử dụng Sản phẩm điện di axit nucleic (Pbài viết)
[1] La J, Dương Q, Zhang X, et al. TFPI là thụ thể hốc đại tràng đối với TcdB từ nhánh siêu độc lực 2 C. difficile. Tế bào. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, một hệ thống biểu hiện gen mới với perox hydro gây ra bởi ứng suất tính chất loại bỏ chất gây ung thư và tác dụng chống lão hóa. Truyền tín hiệu và liệu pháp nhắm mục tiêu. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (NẾU: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Sự ức chế micropeptide PACMP gây ra các tác dụng gây chết tổng hợp bằng cách giảm CtIP và poly(ADP-ribosyl) ation. mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. Sự ức chế tăng trưởng do mức độ (p)ppGpp thay đổi là kết quả của sự không tối ưu phân bổ nguồn lực trong Escherichia coli. Nghiên cứu axit nucleic 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, HarsonowatiW, et al. Xác định tác nhân gây bệnh nấm để kiểm soát sau thu hoạch Phân tích so sánh quá trình phân hủy của cây chanh dây (Passiflora edulis) và đa ô-míc cho thấy Màu tím bền hơn nt đối với các tác nhân gây bệnh hơn là một giống cây trồng màu vàng. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Xuất bản ngày 19 tháng 10 năm 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (NẾU:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Đặc điểm cấu trúc của Trung hòa Nanobody với hoạt động rộng rãi chống lại Các biến thể SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Xuất bản ngày 2 tháng 6 năm 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (NẾU: 5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 là cần thiết cho quá trình tổng hợp Melanin và khả năng gây bệnh của Colletotrichum gloeosporioides. tác nhân gây bệnh. 2020;9(2) :141. xuất bản ngày 20 tháng 2 năm 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. xuất bản ngày 20 tháng 2 năm 2020. doi:10.3390/bệnh nguyên9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Hồ sơ biểu hiện CircRNA ở những người nhạy cảm và kháng deltamethrin
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp hóa sinh Sinh lý học B Sinh hóa Mol Sinh học. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Sự ức chế tăng trưởng do (p) ppGpp thay đổi mức độ kết quả từ việc phân bổ nguồn lực không tối ưu trong Escherichia coli[J]. Nghiên cứu axit nucleic, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. Phổ khối đặc hiệu selenocysteine cho thấy các cấu trúc selenopro đặc trưng cho mô và các selenoprotein ứng cử viên[J]. Hóa chất tế bào sinh học, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Ấn phẩm sử dụng sản phẩm PCR (Một phần)
[1] Vương Y, Phúc Z, L X, và và cộng sự Tế bào chất Cảm biến DNA qua KU tổ hợp TRONG già TCD4+ tế bào tăng cường sức mạnh T tế bào hoạt động sự kiện Và liên quan đến lão hóa tự miễn dịch viêm. Miễn dịch. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Dương X, Cao F, Trương W, và và cộng sự "Ngôi sao" miR-34a Và CXCR4 nhân vật phản diện dựa trên nanoplex cho nhị phânvà hợp tác điều trị di cư lại nữat di căn nhũ hoa ung thư. J Điều khiển Phát hành. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] Kiều Y, Du J, Ghê R, và và A Vật mẫu Và Phát hiện Kim siêu nhỏ Bản vá vì Bệnh vẩy nến MicroRNA Sinh học chỉ điểm
Phân tích TRONG xen kẽ Chất lỏng. Hậu môn Hóa học. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lâm Q, Vâng X, Hoàng Z, và và cộng sự Graphen Dựa trên Oxit Sự đàn áp của Không đặc hiệu TRONG Vòng lặp trung gian đẳng thế sự khuếch đại kém Kích hoạt Nhạy cảm Phát hiện của Cyclooxygenase-2 mARN TRONG Đại tràng Ung thư. Hậu môn Hóa học. 2019;91(24):15694-15702. ngày:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lâm Hỏi, Hoàng Z, Vâng X, và và cộng sự Phòng thí nghiệm TRONG Một ống: Sự cách ly, chiết xuất, Và làđộng vật hoang dã sự khuếch đại phát hiện của exosomal dài không mã hóa ARN của dạ dày bệnh ung thư. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Lưu C, Zou G, và và 5-Formyluracil BẰNG Một Đachức năng Xây dựng Khối TRONG Cảm biến sinh học Thiết kế[J]. Angew Hóa học Int Biên tập Tiếng Anh. 2018 Tháng 7 26;57(31):9689-9693.（IF 11.992）
[7] Vương Tôi, Trương S, Trịnh G, và và cộng sự Tăng-chức-năng Đột biếnion của Thẻ14 Dẫn đến Tự phát Giống bệnh vẩy nến Da Viêm thông qua Tăng cường Tế bào sừng Phản hồi cho IL-17A. Miễn dịch. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Trương Y, Đinh H, Vương X, và và cộng sự MK2 thúc đẩy Tfcp2l1 sự suy thoái thông qua β-TrCP ubiquitin tôiigase ĐẾN điều chỉnh chuột gốc phôi sự tự đổi mới của tế bào. Tế bào Đại diện. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (NẾU:9.423)
[9] Lâm Q,Ye X, Dương B, và và cộng sự Thời gian thực huỳnh quang vòng lặp trung gian đẳng nhiệt khuếch đạisự phân loại thử nghiệm vì nhanh Và nhạy cảm phát hiện của Streptococcus gallolyticus phân loài gallolyticus liên quan đến đại tràng ung thư[J].
Phân tích Và phân tích sinh học hóa học, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Lâm Q, Vâng X, Hoàng Z, và và cộng sự Graphen Dựa trên Oxit Sự đàn áp của Không đặc hiệu TRONG Vòng lặp trung gian đẳng thế sự khuếch đại kém Kích hoạt Nhạy cảm Phát hiện của Cyclooxygenase-2 mARN TRONG Màu sắcctal Ung thư[J]. Phân tích calo hóa học, 2019.（IF6.35）
Trích dẫn:
[1] Loeb LA, Jr R. DNA polymerase và bệnh tật của con người[J]. Nature Reviews Genetics.