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Vorteile

Nachteile

Liposomen-Transfektionsreagenz

1. Liposomen-Transfektionsreagenzien enthalten positiv geladene Lipide, die sich an negativ geladene Nukleinsäuren binden und Lipid-Nukleinsäure-Komplexe bilden.

2. Diese Komplexe werden von der negativ geladenen Zellmembran angezogen.

3. Die Zelle nimmt die Komplexe durch Endozytose in Endosomen auf.

4. Der „Protonenschwamm“-Effekt der Lipide in den Komplexen verhindert die Versauerung des Endosoms, was zur Destabilisierung und Ruptur der Membran führt und die Komplexe ins Zytoplasma freisetzt.

5. Kleine Nukleinsäuren wie siRNA, miRNA oder mRNA können im Zytoplasma arbeiten, während DNA in den Zellkern gelangen muss, um exprimiert zu werden.

6. Im Zellkern wird die DNA in mRNA transkribiert und in Proteine ​​übersetzt, die das fremde Gen exprimieren.

1. Liposomen-Transfektionsreagenzien bieten eine hohe Effizienz bei verschiedenen Zelllinien, einschließlich schwer zu transfizierenden Primärzellen.

2. Sie sind vielseitig und sowohl mit anhaftenden als auch mit Suspensionszellen sowie verschiedenen Nukleinsäuren wie DNA, siRNA und miRNA kompatibel.

3. Diese Reagenzien funktionieren gut in serumhaltigen Medien, wodurch die Notwendigkeit einer Entfernung des Serums vermieden und Zellschäden minimiert werden.

1. Liposomen-Transfektionsreagenzien können für Zellen toxisch sein, insbesondere in hohen Konzentrationen oder über lange Zeiträume, und potenziell das Überleben und die Funktion der Zellen beeinträchtigen.

2. Sie sind im Vergleich zu herkömmlichen Methoden wie der Calciumphosphat-Transfektion teurer.

3. Ihre In-vivo-Anwendung ist aufgrund der Serumclearance, der Anreicherung im Lungengewebe und des Potenzials, starke Entzündungsreaktionen und eine hohe Toxizität hervorzurufen, begrenzt.

PEI Transfektionsreagenz

1. PEI, ein positiv geladenes Polymer, bindet sich an negativ geladene DNA und bildet durch elektrostatische Wechselwirkungen PEI-DNA-Komplexe.

2. Diese Komplexe haften an der negativ geladenen Zellmembran.

3. Zellen nehmen die PEI-DNA-Komplexe durch Endozytose auf und bilden Endosomen.

4. Der „Protonenschwamm“-Effekt von PEI führt dazu, dass Endosomen in der sauren Umgebung anschwellen und platzen, wodurch die Komplexe in das Zytoplasma freigesetzt werden.

5.Im Zytoplasma werden PEI-DNA-Bindungen aufgebrochen, wodurch die DNA in den Zellkern gelangen kann, wo sie transkribiert und in Proteine ​​übersetzt wird.

1. PEI-Transfektionsreagenzien bilden stabile Komplexe mit DNA und verbessern so die Transfektionseffizienz.

2. Sie weisen im Vergleich zu anderen kationischen Polymeren eine geringere Zytotoxizität auf, wodurch die Zelllebensfähigkeit und -funktion erhalten bleibt.

3. PEI-Reagenzien bieten eine kostengünstige Lösung, insbesondere für groß angelegte Transfektionen wie die Produktion viraler Vektoren.

4. PEI-Reagenzien sind in GMP-Qualität für die klinische und kommerzielle Produktion erhältlich, wodurch Qualität und Konformität gewährleistet werden.

1. PEI-Transfektionsreagenzien sind nur begrenzt vielseitig einsetzbar, werden hauptsächlich für DNA verwendet und sind bei anderen Nukleinsäuren wie mRNA, siRNA und miRNA weniger wirksam.

2. Sie zeigen eine hohe Effizienz bei der Virusverpackung und Proteinexpression in bestimmten Zelltypen, wie etwa HEK293-Zellen, zeigen jedoch bei schwer transfizierbaren Zellen eine schlechte Leistung.

Calciumphosphat-Transfektionsreagenz

1. DNA/Calciumphosphat-Kopräzipitate bilden sich im HEPES-Puffer mit Phosphat, wobei die negative Ladung der DNA an positive Calciumionen bindet.

2. Zellen nehmen diese an ihrer Oberfläche haftenden Kopräzipitate durch Endozytose auf, ein entscheidender Schritt für die Transfektionseffizienz.

3. Innerhalb der Zellen setzen die Kopräzipitate DNA frei, was zu einer vorübergehenden Expression oder stabilen Integration in das Genom führen kann.

1. Die Calciumphosphat-Transfektion ist kostengünstig und für Labore mit begrenztem Budget geeignet.

2. Es ist leicht durchzuführen, erfordert einfache Schritte und nur minimale technische Kenntnisse.

3. Es kann sowohl für die vorübergehende Proteinexpression als auch für die Erstellung stabiler Zelllinien verwendet werden.

1. Die Effizienz der Calciumphosphat-Transfektion ist variabel und abhängig von Faktoren wie pH-Wert und DNA-Reinheit, was insbesondere bei unreiner DNA zu fehlgeschlagenen Transfektionen führen kann.

2. Es ist nicht für alle Zelltypen geeignet, wird hauptsächlich für HEK293-Zellen verwendet und ist bei Primärzellen und einigen anderen Zelltypen weniger wirksam.