Capítulo 1: Tecnología PCR
1.1 Principios de la PCR
PCR (reacción en cadena de la polimerasa), o reacción en cadena de la polimerasa, se refiere a la ADN polimerasa catalizada por la cadena madre de ADN como plantilla, con una Primer específico Para la ampliación del punto de partida, la adición de dNTP, Mg2+ y factores de extensión, mejora de la amplificación factores. A través de pasos de desnaturalización, recocido y extensión, La replicación in vitro de la cadena hija es complementaria a la plantilla de ADN de la cadena madre, que puede amplificar rápida y específicamente cualquier ADN objetivo in vitro.
1.2 Clasificación de las polimerasas de ADN
La polimerasa de ADN es una enzima importante para celular replicación del ADN. Según la estabilidad térmica, la capacidad de síntesis, la velocidad, la fidelidad y especificidad, se puede clasificar como ADN polimerasa Taq, ADN polimerasa de alta fidelidad, ADN polimerasa de inicio en caliente, ADN polimerasa de expansión directa, ADN polimerasa de fragmentación larga. enzima, ADN polimerasa rápida, ADN polimerasa múltiple, etc..
La más común de ellas es la ADN polimerasa Taq, que tiene actividad polimerasa en el extremo 5'→3' y actividad de exonucleasa en el extremo 5'→3', pero no Actividad de corrección del extremo 3'→5'. La característica más importante de Taq es su buena resistencia al calor, que puede soportar la desnaturalización térmica. paso de PCR, haciendo innecesario agregar más enzima a mitad del proceso. Sin embargo, Taq tiene baja fidelidad porque no tiene actividad de corrección de pruebas. Su fidelidad Se logra principalmente mediante la concentración y la proporción de iones de magnesio y dNTP.
La ADN polimerasa de alta fidelidad contiene un centro de polimerización y un centro de escisión, el centro de polimerización tiene una actividad de ADN polimerasa 5'→3', que puede catalizar La síntesis del ADN en la dirección de 5'→3'; el centro de escisión tiene una actividad exonucleasa 3'→5', que puede llevar a cabo la reparación de desajustes de bases. Por lo tanto, además de las características de la ADN polimerasa Taq, la ADN polimerasa de alta fidelidad también tiene una actividad correctiva, responsable de extirpando El desparejado nucleótidos, garantizando así la precisión del producto..
El diagrama de arriba muestra cómo funciona la ADN polimerasa. [1].
PCR directa (PCR directa) es una reacción que utiliza muestras no purificadas para la amplificación por PCR y animales o tejidos vegetales para amplificación directa. Actualmente, Yeasen Los kits de PCR directa se pueden utilizar para la amplificación por PCR de muestras crudas como plantas, tejidos animales, sangre, etc. sin necesidad de purificación de ácidos nucleicos, lo que Simplifica enormemente el proceso de los experimentos de PCR.
La figura anterior muestra la técnica de PCR directa.
A. Método directo: tomar una pequeña cantidad de muestra y agregarla directamente a la PCR Mezcla maestra para identificación por PCR;
B. Método de lisis: Después de tomar la muestra, agréguela a la solución de lisis para liberar el genoma, tome una pequeña cantidad del sobrenadante de lisis y agréguelo a la mezcla maestra de PCR para la identificación por PCR.
1.3 Preguntas frecuentes y soluciones
| Problema | Razón | Solución |
| Sin bandas amplificadas | Problemas con el sistema de electroforesis | Solucionar problemas de colorante de ácido nucleico, concentración de gel y tampón de electroforesis. |
| Temperatura de desnaturalización inexacta | ¿La temperatura indicada en el instrumento de PCR es coherente con la temperatura real? Si la temperatura es demasiado alta, la enzima se degrada rápidamente. en los primeros ciclos; si es demasiado baja, la desnaturalización de la plantilla no es completa. | |
| Contaminación de proteasas y nucleasas en el sistema de reacción. | El sistema de reacción debe calentarse a 95 °C durante 5 a 10 minutos antes de agregar la enzima Taq. | |
| PAGError de rimer | Verifique la especificidad de los cebadores o rediseñe los cebadores utilizando BLAST. | |
| La plantilla contiene impurezas | En particular, los tejidos fijados con formaldehído e incluidos en parafina a menudo contienen ácido fórmico, lo que provoca la despurinización del ADN y afecta los resultados de la PCR. | |
| Deterioro y falla del cebador | Confirme que los cebadores sintéticos sean correctos, estén purificados o inactivados debido a condiciones de almacenamiento inadecuadas. | |
| Menor cantidad de producto de PCR | Temperatura de recocido inadecuada | Se diseñó una reacción de PCR en gradiente para optimizar la temperatura de hibridación con un gradiente de 2 grados. |
| Presencia de inhibidores en la plantilla de ADN | Asegúrese de que la plantilla de ADN esté limpia. | |
| Desnaturalización prolongada | La desnaturalización prolongada conduce a la inactivación de la ADN polimerasa. | |
| Extensión demasiado corta | El tiempo de extensión es demasiado corto. Establezca el tiempo de extensión según el principio de 1 kb/min. | |
| Cantidad de plantilla de ADN demasiado baja | Aumentar la cantidad de plantilla de ADN. | |
| Cantidad insuficiente de primers | Aumente el contenido de cebador en el sistema. | |
| Número insuficiente de ciclos de PCR | Aumentar el número de ciclos de reacción. | |
| Varias bandas | Pobre especificidad del cebador | Se utilizó software de diseño de cebadores como BLAST y Primer para verificar la especificidad de los cebadores o rediseñarlos. |
| Número excesivo de bucles | Aumente la cantidad de plantilla adecuadamente y reduzca el número de ciclos. | |
| Contaminación del ADN exógeno | Asegúrese de un funcionamiento limpio. | |
| Cantidad excesiva de plantillas | La cantidad de ADN plasmídico debe ser <50 ng, mientras que el ADN genómico debe ser <200 ng. | |
| Demasiada imprimación | Reducir la cantidad de cebadores en el sistema de reacción. | |
| La solución de reacción no está bien mezclada. | Asegúrese de que el tampón de reacción esté completamente derretido y bien mezclado. | |
| Mg Alta concentración | Ajuste adecuadamente la concentración de Mg utilizada. | |
| Dosis elevadas de enzimas o mala calidad de las mismas | Reducir la cantidad de enzima o sustituirla por otra fuente. | |
| Baja temperatura de recocido, largo tiempo de recocido y extensión. | Aumente la temperatura de hibridación para reducir el tiempo de desnaturalización y extensión, o diseñe una reacción de PCR en gradiente para optimizar la temperatura de hibridación. | |
| Problemas con la propia mezcla de PCR | Si es premezcla de PCR puede ser la calidad del propio reactivo, se recomienda cambiar de lote u otras marcas. | |
| Talla incorrecta | doontaminación | Limpie el banco con reactivos y puntas nuevos. |
| Uso incorrecto de plantillas o primers | Reemplazar primers y plantillas. | |
| GRAMOenotipo | Se realizaron análisis de secuencia y estudios BLAST en los genes estudiados. |
Capítulo 2: Electroforesis de ácidos nucleicos
2.1 Principios de la electroforesis de ácidos nucleicos
El movimiento de partículas cargadas bajo la acción de un campo eléctrico hacia un electrodo opuesto a sus propiedades eléctricas se denomina electroforesis. Utilizando las partículas cargadas en el campo eléctrico moverse a diferentes velocidades y lograr la separación de la tecnología se llama electroforesis. La electroforesis de ácidos nucleicos es una herramienta importante para la investigación de ácidos nucleicos y es un parte integral de técnicas como sondas de ácidos nucleicos, amplificación de ácidos nucleicos y análisis de secuencias. La electroforesis de ácidos nucleicos suele llevado a cabo en agarosa o Geles de poliacrilamida. Diferentes concentraciones de La agarosa y la poliacrilamida pueden formar geles con diferentes tamaños de malla de tamiz molecular, que pueden usarse para separar fragmentos de ácidos nucleicos de diferentes pesos moleculares.
2.2 Electroforesis en gel de agarosa
La agarosa es un polímero lineal extraído de las algas marinas. La agarosa se calienta en una solución tampón y se funde hasta formar un sol transparente que luego se vierte en un molde de gelatina y se solidifica para formar una matriz sólida conocida como gel, cuya densidad depende de la concentración de agarosa.
Agarosa La electroforesis en gel es un tipo de método de electroforesis que utiliza agarosa como medio de soporte y La principal diferencia entre el analítico El principio y otros soportes de la electroforesis es que tiene la Doble papel de "tamiz molecular" y "electroforesis". Se coloca gel en el campo eléctrico, bajo La acción de la campo eléctrico, la carga Los ácidos nucleicos migran a la positivo polo a través de La malla de el gel. El tasa de La migración se ve afectada por el tamaño de moléculas de ácido nucleico, concentración de agarosa, voltaje aplicado, campo eléctrico, tampón de electroforesis y la cantidad de colorante incrustado. Después del tiempo apropiado de electróforoses bajo Diferentes condiciones, fragmentos de ácido nucleico con diferentes tamaños y conformaciones estarán en diferentes posiciones en el gel, logrando así el propósito de la separación.La separación del gel de agarosa Tiene una amplia gama, se utiliza comúnmente en la recuperación de gel de corte de ADN, aislamiento de ADN y se utiliza para respaldar si el ADN es recombinante. plásmido, etc. Ya sea que el plásmido esté cortado o no, diferentes concentraciones de gel de agarosa se puede separar de la longitud de 200 pb a 50kb de ADN fragmentos.
2.3 Métodos experimentales
Haciendo pegamento
Tomemos como ejemplo una concentración del 1%: pese 1 g de agarosa, viértalo en un matraz cónico de 250 ml, agregue 100 ml de tampón de electroforesis 0,5×TBE y mezclarlo bien, hervirlo en un horno microondas y luego Séquelo al aire a unos 60 ℃, agregue una cantidad adecuada de tinte de ácido nucleico y agítelo bien y luego viértalo en una placa de gel limpia que ya se haya preparado, tome un peine con ambas manos para Introdúzcalo en la solución de gel verticalmente y espere. gel para ser Se deja enfriar de forma natural hasta que esté completamente solidificado (25-30min).
Retire el pegamento haciendo el peine
Transfiera con cuidado el gel al tanque de electroforesis (ya sea con la bandeja de gel o solo el gel).), Coloque el lado del pocillo de muestra en el polo negativo y agregue 0,5× TBE tampón de electroforesis hasta que el gel esté aproximadamente 1 mm por debajo.
Agregar muestra
Agregue un buffer de carga de 10× (carga búfer) a las muestras de ADN, Mezcle bien y luego agregue lentamente la mezcla de muestra a la solución.bgel fusionado pozos con una pistola de pipeta, añadiendo de 5 a 10 μL de muestra por pocillo (no más de 40 μL). Generalmente, el primer pocillo debe llenarse con marcador de ADN, el segundo con control positivo (ADN definido), y el tercero con control negativo (reactivo o agua)), y Se debe registrar el orden de las muestras.
Electroforesis
Cubrir el Tanque de electroforesis, conectar el cables, encienda la alimentación y configure el voltaje y la corriente de la electroforesis. y el tiempo parámetros. Generalmente, el El voltaje no debe exceder los 5 v/cm (la longitud se refiere a la distancia entre los polos positivo y negativo del tanque de electroforesis), y El tiempo de electroforesis es generalmente 15-30 minutos.
Fin de la electroforesis
Eliminar el gel (sin bandeja de gel) y tomar una imagen bajo el sistema de imágenes UV para obtener una imagen electroforética clara, luego editar la imagen electroforética con el software de edición de imágenes y Etiquételo con la información de la muestra, la fecha y el operador.
2.4 Preguntas frecuentes y soluciones
| Problema | Razón | Solución |
| Falta banda objetivo | El ADN pequeño se queda sin gel | Acortar el tiempo de electroforesis, reducir el voltaje, aumentar la concentración de gel. |
| Las bandas de ADN de tamaño de peso molecular similar no se distinguen fácilmente | Aumente el tiempo de electroforesis para que coincida con la concentración óptima de gel. | |
| El fragmento objetivo es demasiado grande para la electroforesis convencional. | Analizado mediante electroforesis en gel pulsado. | |
| Clip sin propósito | El proceso de PCR fue defectuoso y no amplificó el producto objetivo. | |
| Bandas de ADN borrosas | Tampón de electroforesis envejecido | Cuando el tampón de electroforesis se usa muchas veces, la fuerza iónica se reducirá, el valor de pH aumentará lentamente y la capacidad de lavado se debilitará, lo que afectará el efecto de la electroforesis, por lo que se recomienda cambiar el tampón de electroforesis con frecuencia. |
| Degradación del ADN | Evite la contaminación por nucleasas. | |
| Las condiciones de electroforesis utilizadas no son adecuadas para la electroforesis. | El voltaje de electroforesis no debe exceder los 20 V/cm y la temperatura debe ser <30 °C; la temperatura de electroforesis de cadenas grandes de ADN debe ser <15 °C; verificar si el tampón de electroforesis utilizado tiene suficiente capacidad de amortiguación. | |
| Muestreo excesivo de ADN | Reducir la cantidad de ADN muestreado en el gel. | |
| Las muestras de ADN son demasiado saladas | El exceso de sal se eliminó mediante precipitación con etanol antes de la electroforesis. | |
| contaminación de proteínas | La extracción de fenol antes de la electroforesis elimina las proteínas. | |
| Concentración de muestra demasiado alta | La concentración de la muestra superior debe ser inferior a 500 ng/pocillo; una concentración demasiado alta afectará la velocidad de la electroforesis y el funcionamiento, lo que provocará arrastre y borrosidad. | |
| Bandas débiles o inexistentes | Tamaño de muestra de ADN insuficiente | Aumentar la cantidad de captación de ADN |
| Degradación del ADN | Cómo evitar la contaminación del ADN por nucleasas | |
| Fuente de luz inadecuada para colorantes de ácidos nucleicos | Seleccione la fuente de luz de longitud de onda adecuada de acuerdo con las instrucciones del tinte de ácido nucleico. | |
| Bandas no separadas | falta de tiempo | Aumentar el tiempo de electroforesis |
| Concentración de gel incorrecta | La concentración de pegamento es demasiado alta, lo que genera demasiada resistencia a la separación. | |
| La concentración de iones de sal en la muestra es demasiado alta. | La alta concentración de iones de sal aumenta la resistencia electroforética y evita la separación de bandas, por ejemplo, muestras digeridas que contienen tampón de endonucleasa. | |
| Bandas no específicas | Contaminación por ARN | Re-preparación de muestras |
| Contaminación entre muestras | Sustitución de la punta durante el llenado, evitando derrames de muestras con volúmenes >40 μl. |
2.5 Electroforesis en gel de poliacrilamida
Los geles de poliacrilamida se forman por la reacción química entre el monómero de acrilamida, los catalizadores de polimerización en cadena N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina (TEMED) y persulfato de amonio, y el agente de reticulación N,N'-metilenbisacrilamida. El monómero de acrilamida se polimeriza en presencia de un catalizador para formar cadenas largas. cadenas, que son reticulado por un agente de reticulación para formar un gel, cuyo tamaño de poro está determinado por la longitud de la cadena y el grado de reticulación. El tamaño de poro está determinado por la longitud de la cadena y el grado de reticulación. La longitud de la cadena depende de La concentración de acrilamida y el grado de reticulación del polímero se pueden cambiar ajustando la proporción de acrilamida al agente de reticulación..
La electroforesis en gel de poliacrilamida se puede utilizar para separado muestras basadas en diferencias en cargar, tamaño molecular y forma de las muestras sometidas a electroforesisCombina el tamizado molecular y la electroestática. y tiene un mayor poder de resolución que la electroforesis en gel de agarosa. Fragmentos de ADN diferenciándose solamente por un nucleótido se pueden separar.
La electroforesis en gel de poliacrilamida se utiliza para analizar y preparar fragmentos de ADN de menos de 1 kb de longitud. el tamaño de Los fragmentos de ácido nucleico que se van a aislar, geles de diferente se puede preparar.
Los rangos de separación efectivos para diferentes concentraciones de acrilamida y ADN se muestran en la siguiente tabla:
| Concentración. (%) | Rango de separación efectivo (pb) |
| 3.5 | 100 a 2000 |
| 5 | 80 a 500 |
| 8 | 60 a 400 |
| 12 | 40 a 200 |
| 15 | 25 a 150 |
| 20 | 10 a 100 |
2.4 Directrices para la selección de productos relacionados
PCR convencional | ||||
| Especificación | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Longitud de amplificación | ≤10-15 KB-español:kb | ≤5 kb | ≤5 kb | ≤4 kb |
| Tiempo de extensión | 1-10 segundos/kb | 30 segundos/kb | 30 segundos/kb | 30 segundos/kb |
| Estructura final del producto | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Temperatura de recocido | 60℃ | Temperatura-(2~5)℃ | Temperatura-(2~5)℃ | Temperatura-(2~5)℃ |
| Rango de compatibilidad de GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| Actividad de la exonucleasa 5'-3' | Presente | Presente | Presente | Presente |
| PCR de colonias | Adecuado | Adecuado | Adecuado | Adecuado |
| Identificación de genes | Adecuado | Adecuado | Adecuado | Adecuado |
| PCR multiplexada | No apto | No apto | No apto | PCR de 3-4 plexos |
| Indicador de electroforesis | Rojo púrpura | Azul | Incoloro | Azul |
| Arranque en caliente | Arranque en caliente | No arranque en caliente | No arranque en caliente | Arranque en caliente |
| Premezcla/Kit | Premezcla | Premezcla | Premezcla | Premezcla |
PCR directa | ||||
| Especificación | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Tipo de producto | Amplificación directa en ratones | Amplificación directa de sangre | Amplificación directa de plantas | |
| Longitud de amplificación | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb | |
| Tiempo de extensión | 30 s/kb | 3-5 s/kb para ≤2 kb, | 60 s/kb | |
| 10 s/kb para ≤8 kb | ||||
| Tiempo de lisis de la muestra | 15 minutos | 0-3 minutos | 0-10 minutos | |
| Estructura final del producto | Extremo romo | Extremo romo | Extremo romo | |
| Temperatura de recocido | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| Rango de compatibilidad de GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| Actividad de la exonucleasa 5'-3' | √ | √ | √ | |
| Identificación de genes | √ | √ | √ | |
| PCR multiplexada | 3-4 complejos | |||
| Amplificación directa de muestras | √ | √ | √ | |
| Indicador de electroforesis | Azul | Incoloro | Azul | |
| Arranque en caliente | √ | √ | √ | |
| Premezcla/Kit | Kit (con Mix) | Kit (con Mix + Buffer) | Kit (con Mix) | |
| Organismos adecuados | Ratón, rata | Humano, ratón, cabra, pollo, cerdo, etc. | Arroz, maíz, tabaco, colza, trigo, soja, etc. | |
| Tejido/material adecuado | Cola, oreja, dedo del pie (con músculo) y otros órganos. | Sangre fresca con EDTA, heparina, citrato, etc., sangre refrigerada (congelada), gotas de sangre seca comerciales | Hojas jóvenes, hojas viejas, plántulas, tallos jóvenes. | |
| Entrada de muestra | Tejido: 5-10 mg; Cola: 1-5 mm | Sangre entera: 0,5%-20%, mancha de sangre seca: 1 mm² | Hoja: 1-10 mm, Semilla: 1-3 mm | |
PCR de alta fidelidad | ||||
| Especificación | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Longitud de amplificación | ≤10 kb de ADN genómico, ≤10 kb de ADNc, ≤16 kb de ADN lambda | ≤10 kb de ADN genómico, ≤10 kb de ADNc, ≤13 kb de ADN lambda | ≤10 kb de ADN genómico, ≤10 kb de ADNc, ≤13 kb de ADN lambda | |
| Tiempo de extensión | 5 segundos/kb | 30 segundos/kb | 30 segundos/kb | |
| Fidelidad (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Estructura final del producto | Extremo romo | Extremo romo | Extremo romo | |
| Temperatura de recocido | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| Rango de compatibilidad de GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| Actividad de la exonucleasa 5'-3' | Ausente | Ausente | Ausente | |
| Indicador de electroforesis | Azul | Incoloro | Azul | |
| Enzima única/premezcla | Premezcla | Enzima única | Premezcla | |
| Tolerancia | / | / | Sangre, lisado de tejido de ratón | |
Electroforesis de ácidos nucleicos | ||||
| Categoría de producto | Gato N° | Nombre del producto | Solicitud | |
| Agarosa | 10208ES | Agarosa | Electroforesis de ácidos nucleicos de rutina | |
| 10221ES | Agarosa de alto tamizado (grado PCR) | Adecuado para separar fragmentos de ADN de 20 pb a 800 pb, comparable al gel de poliacrilamida. | ||
| 10226ES | Tabletas de agarosa (0.5 g/comprimido) | Conveniente para aplicaciones rutinarias de agarosa. | ||
| Colorante de ácido nucleico | 10202ES | Tinción en gel de ácidos nucleicos YeaRed (10 000× en agua) | Soluble en agua, con propiedades espectrales similares al EB, excitable a luz UV de 300 nm. | |
| Marcador de ADN | 10510ES | Escalera de ADN GoldBand de 1 kb | 250-12000 pb (13 bandas) | |
| 10515ES | Escalera de ADN GoldBand de 50 pb | 50-1000 pb (14 bandas) | ||
| 10507ES | Escalera de ADN GoldBand de 100 pb | 100-1500 pb (12 bandas) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 pb más escalera de ADN | 100-3000 pb (14 bandas) | ||
| 10517ES | Escalera de ADN GoldBand de 200 pb | 200-5000 pb (12 bandas) | ||
| 10518ES | Escalera de ADN GoldBand de 500 pb | 500-5000 pb (8 bandas) | ||
| 10501ES | Marcador de ADN GoldBand DL2000 | 100-2000 pb (6 bandas) | ||
| 10504ES | Marcador de ADN GoldBand DL5000 | 100-5000 pb (9 bandas) | ||
| 10505ES | Marcador de ADN GoldBand DL10,000 | 100-10000 pb (10 bandas) | ||
| 10511ES | Escalera de ADN a escala completa GoldBand | 100-12000 pb (20 bandas) | ||
| 10512ES | Marcador de ADN GoldBand DL15000 | 250-15000 pb (7 bandas) |
2.5 Publicaciones que utilizan productos de electroforesis de ácidos nucleicos (PArtial)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI es un receptor de cripta colónica para TcdB del clado 2 hipervirulento C. difficile. Célula. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, un nuevo sistema de expresión genética con peróxido de hidrógeno evocado por estrés. Propiedad de eliminación de uros y efecto antienvejecimiento. Transducción de señales y terapia dirigida. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (SI: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. La inhibición del micropéptido PACMP provoca efectos letales sintéticos disminuyendo el CtIP y poli(ADP-ribosilación). mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (SI:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. La supresión del crecimiento por niveles alterados de (p)ppGpp resulta de un manejo no óptimo. asignación de recursos en Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (SI:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, HarsonowatiW, et al. Identificación de patógenos fúngicos para controlar la poscosecha. Análisis comparativo de vías multiómicas y desintegraciones de la maracuyá (Passiflora edulis) revela El morado es más resistente nt a los patógenos que un cultivar amarillo. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Publicado el 19 de octubre de 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (SI:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Caracterización estructural de un Nanocuerpo neutralizante con amplia actividad contra Variantes del SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Publicado el 2 de junio de 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (SI:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 es esencial para la biosíntesis y patogenicidad de la melanina de Colletotrichum gloeosporioides. patógenos. 2020;9(2) :141. publicado 20 de febrero de 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Publicado 20 de febrero de 2020. doi:10.3390/patógenos9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Perfiles de expresión de circRNA en células sensibles y resistentes a la deltametrina
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp Bioquímica Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (SI:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Supresión del crecimiento por ppGpp alterado (p) Los niveles resultan de una asignación no óptima de recursos en Escherichia coli[J]. Investigación en ácidos nucleicos, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. La espectrometría de masas específica de selenocisteína revela selenoproteomas y selenoproteínas candidatas diferenciadas por tejido [J ]. Química celular Biología, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Publicaciones que utilizan productos de PCR (parcial)
[1] Wang Y, Fu O, LiX, y Alabama. Citoplasmático Detección de ADN por KU complejo en viejo T CD4+ celúla potencia yo celúla activa ción y relacionado con el envejecimiento autoinmune Inflamación. Inmunidad. 2021;54(4):632-647.e9. yo:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W., y Alabama. "Estrella" miR-34a y CXCR4 antagonista basado nanoplex para binarioy cooperativa tratamiento de la migración contraa metastásico mama Cáncer. J Control Lanzamiento. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(SI:7.727)
[3] Quia Y, Yo J, En R, y al. Un Muestra y Detección Microaguja Parche para Soriasis MicroARN Biomarcador
Análisis en Intersticial Fluido anal Química. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lin Q,Ye X, Huang O, y Alabama. Grafeno A base de óxido Supresión de No especificidad en Mediada por bucle Isotérmica Mala amplificación Habilitando a los sensibles Detección de la ciclooxigenasa-2 ARNm en Colorrectal Cáncer. Anal Química. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(SI:6.350)
[5] Lin Q, Huang Z,Ye X, y Alabama. Laboratorio en a tubo: Aislamiento, extracción, y estermal amplificación detección de exosomal largo sin codificación ARN de gástrico cáncer. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu DO, Zou GRAMO, y al. 5-formiluracilo como a Multifuncional Edificio Bloquear en Biosensor Diseños[J]. Angew Química Int Ed Engl. 26 de julio de 2018;57(31):9689-9693.（SI 11.992）
[7] Wang METRO, Zhang S, Zheng GRAMO, y Alabama. Ganancia de función mutarion de Tarjeta14 Conduce a Espontáneo Similar a la psoriasis Piel Inflamación a través de Mejorado Queratinocito Respuesta a IL-17A. Inmunidad. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Zhang Y, Timbre H. Wang X. y Alabama. MK2 promueve Tfcp2l1 degradación a través de β-TrCP ubiquitina yoigasa a regular ratón tallo embrionario autorrenovación celular. Celúla Representante 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (SI:9.423)
[9] Lin Q,Ye X, Yang B, y Alabama. En tiempo real fluorescencia mediada por bucle isotérmico amplificadoración ensayo para rápido y sensible detección de estreptococo Gallolyticus subsp. gallolitoictus asociado con colorrectal cáncer[J].
Analítico y bioanalítico química, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Lin Q,Ye X, Huang O, y Alabama. Grafeno A base de óxido Supresión de No especificidad en Mediada por bucle Isotérmica Mala amplificación Habilitación de datos sensibles Detección de la ciclooxigenasa-2 ARNm en Colorearctal Cáncer[J]. Análisis California Química, 2019.（IF6.35）
Citación:
[1] Loeb LA, Jr R. Polimerasas de ADN y enfermedades humanas[J]. Nature Reviews Genetics.