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Principio

Vantaggi

Svantaggi

Reagente di trasfezione liposomiale

1. I reagenti di trasfezione dei liposomi contengono lipidi caricati positivamente che si legano agli acidi nucleici caricati negativamente per formare complessi lipidi-acidi nucleici.

2. Questi complessi sono attratti dalla membrana cellulare carica negativamente.

3. La cellula ingloba i complessi negli endosomi tramite endocitosi.

4. L'effetto "spugna protonica" dei lipidi nei complessi impedisce l'acidificazione degli endosomi, portando alla destabilizzazione e alla rottura della membrana, con conseguente rilascio dei complessi nel citoplasma.

5. Piccoli acidi nucleici come siRNA, miRNA o mRNA possono agire nel citoplasma, mentre il DNA deve entrare nel nucleo per essere espresso.

6. Una volta nel nucleo, il DNA viene trascritto in mRNA e tradotto in proteine, esprimendo il gene estraneo.

1. I reagenti di trasfezione dei liposomi offrono un'elevata efficienza con varie linee cellulari, comprese le cellule primarie difficili da trasfettare.

2. Sono versatili, compatibili sia con cellule aderenti che in sospensione e con vari acidi nucleici come DNA, siRNA e miRNA.

3. Questi reagenti funzionano bene nei terreni contenenti siero, evitando la necessità di rimuovere il siero e riducendo così al minimo i danni cellulari.

1. I reagenti di trasfezione dei liposomi possono essere tossici per le cellule, soprattutto ad alte concentrazioni o per lunghi periodi, compromettendo potenzialmente la sopravvivenza e la funzione delle cellule.

2. Sono più costosi rispetto ai metodi tradizionali come la trasfezione con fosfato di calcio.

3. La loro applicazione in vivo è limitata a causa della clearance sierica, dell'accumulo nel tessuto polmonare e del potenziale di causare forti risposte infiammatorie e elevata tossicità.

Isola del Principe Edoardo reagente di trasfezione

1. Il PEI, un polimero caricato positivamente, si lega al DNA caricato negativamente per formare complessi PEI-DNA attraverso interazioni elettrostatiche.

2. Questi complessi si legano alla membrana cellulare carica negativamente.

3. Le cellule inglobano i complessi PEI-DNA tramite endocitosi, formando gli endosomi.

4. L'effetto "spugna protonica" del PEI provoca il rigonfiamento e la rottura degli endosomi nell'ambiente acido, rilasciando i complessi nel citoplasma.

5.Nel citoplasma, i legami PEI-DNA si rompono, consentendo al DNA di entrare nel nucleo, dove viene trascritto e tradotto in proteine.

1. I reagenti di trasfezione PEI formano complessi stabili con il DNA, migliorando l'efficienza della trasfezione.

2. Hanno una citotossicità inferiore rispetto ad altri polimeri cationici, preservando la vitalità e la funzione cellulare.

3. I reagenti PEI offrono una soluzione conveniente, soprattutto per le trasfezioni su larga scala come la produzione di vettori virali.

4. I reagenti PEI sono disponibili in qualità GMP per la produzione clinica e commerciale, garantendo qualità e conformità.

1. I reagenti di trasfezione PEI hanno una versatilità limitata, vengono utilizzati principalmente per il DNA e sono meno efficaci con altri acidi nucleici come mRNA, siRNA e miRNA.

2. Mostrano un'elevata efficienza in specifici tipi di cellule, come le cellule HEK293, per il confezionamento del virus e l'espressione proteica, ma hanno prestazioni scadenti con cellule difficili da trasfettare.

Reagente di trasfezione del fosfato di calcio

1. I coprecipitati di DNA/fosfato di calcio si formano nel tampone HEPES con fosfato, dove la carica negativa del DNA si lega agli ioni calcio positivi.

2. Le cellule inglobano questi coprecipitati, che aderiscono alla loro superficie, attraverso l'endocitosi, un passaggio fondamentale per l'efficienza della trasfezione.

3. All'interno delle cellule, i coprecipitati rilasciano DNA, che può portare a un'espressione transitoria o a un'integrazione stabile nel genoma.

1. La trasfezione del fosfato di calcio è conveniente e adatta ai laboratori con budget limitati.

2. È facile da eseguire: richiede semplici passaggi e competenze tecniche minime.

3. Può essere utilizzato sia per l'espressione proteica transitoria sia per la creazione di linee cellulari stabili.

1. L'efficienza della trasfezione del fosfato di calcio è variabile e sensibile a fattori quali pH e purezza del DNA, che possono portare a trasfezioni fallite, soprattutto con DNA impuro.

2. Non è adatto a tutti i tipi di cellule, viene utilizzato principalmente per le cellule HEK293 ed è meno efficace per le cellule primarie e alcuni altri tipi di cellule.