La trasfezione cellulare è una tecnica per introdurre acidi nucleici esogeni (come DNA, mRNA, siRNA, miRNA, ecc.) nelle cellule e svolge un ruolo cruciale nella moderna ricerca biomedica. Man mano che la ricerca scientifica continua ad approfondire, anche la domanda di una varietà di tipi di cellule è diventata sempre più diversificata, spaziando dalle comuni cellule HEK293 a tipi speciali di cellule tumorali e cellule primarie, ciascuna con le sue caratteristiche e requisiti unici. Allo stesso modo, diversi tipi di acidi nucleici richiedono anche strategie di trasfezione specifiche per garantire un trasporto genico efficiente e sicuro. Pertanto, la scelta del reagente di trasfezione giusto è essenziale per il successo dell'esperimento.
I reagenti di trasfezione chimica sono strumenti indispensabili nella ricerca in biologia cellulare, che introducono acidi nucleici come DNA, mRNA, siRNA, miRNA, ecc. nelle cellule attraverso diversi meccanismi per ottenere l'espressione genica, il silenziamento o studi funzionali. Attualmente, i reagenti di trasfezione chimica comunemente utilizzati includono principalmente reagenti di trasfezione liposomiale, reagenti di trasfezione PEI e reagenti di trasfezione di fosfato di calcio, ciascuno con i suoi vantaggi unici e scenari applicabili.
Tabella 1: Quali sono le differenze tra i diversi reagenti di trasfezione chimica
Categoria di prodotto | Principio | Vantaggi | Svantaggi |
Reagente di trasfezione liposomiale | 1. I reagenti di trasfezione dei liposomi contengono lipidi caricati positivamente che si legano agli acidi nucleici caricati negativamente per formare complessi lipidi-acidi nucleici. 2. Questi complessi sono attratti dalla membrana cellulare carica negativamente. 3. La cellula ingloba i complessi negli endosomi tramite endocitosi. 4. L'effetto "spugna protonica" dei lipidi nei complessi impedisce l'acidificazione degli endosomi, portando alla destabilizzazione e alla rottura della membrana, con conseguente rilascio dei complessi nel citoplasma. 5. Piccoli acidi nucleici come siRNA, miRNA o mRNA possono agire nel citoplasma, mentre il DNA deve entrare nel nucleo per essere espresso. 6. Una volta nel nucleo, il DNA viene trascritto in mRNA e tradotto in proteine, esprimendo il gene estraneo. | 1. I reagenti di trasfezione dei liposomi offrono un'elevata efficienza con varie linee cellulari, comprese le cellule primarie difficili da trasfettare. 2. Sono versatili, compatibili sia con cellule aderenti che in sospensione e con vari acidi nucleici come DNA, siRNA e miRNA. 3. Questi reagenti funzionano bene nei terreni contenenti siero, evitando la necessità di rimuovere il siero e riducendo così al minimo i danni cellulari. | 1. I reagenti di trasfezione dei liposomi possono essere tossici per le cellule, soprattutto ad alte concentrazioni o per lunghi periodi, compromettendo potenzialmente la sopravvivenza e la funzione delle cellule. 2. Sono più costosi rispetto ai metodi tradizionali come la trasfezione con fosfato di calcio. 3. La loro applicazione in vivo è limitata a causa della clearance sierica, dell'accumulo nel tessuto polmonare e del potenziale di causare forti risposte infiammatorie e elevata tossicità. |
Isola del Principe Edoardo reagente di trasfezione | 1. Il PEI, un polimero caricato positivamente, si lega al DNA caricato negativamente per formare complessi PEI-DNA attraverso interazioni elettrostatiche. 2. Questi complessi si legano alla membrana cellulare carica negativamente. 3. Le cellule inglobano i complessi PEI-DNA tramite endocitosi, formando gli endosomi. 4. L'effetto "spugna protonica" del PEI provoca il rigonfiamento e la rottura degli endosomi nell'ambiente acido, rilasciando i complessi nel citoplasma. 5.Nel citoplasma, i legami PEI-DNA si rompono, consentendo al DNA di entrare nel nucleo, dove viene trascritto e tradotto in proteine. | 1. I reagenti di trasfezione PEI formano complessi stabili con il DNA, migliorando l'efficienza della trasfezione. 2. Hanno una citotossicità inferiore rispetto ad altri polimeri cationici, preservando la vitalità e la funzione cellulare. 3. I reagenti PEI offrono una soluzione conveniente, soprattutto per le trasfezioni su larga scala come la produzione di vettori virali. 4. I reagenti PEI sono disponibili in qualità GMP per la produzione clinica e commerciale, garantendo qualità e conformità. | 1. I reagenti di trasfezione PEI hanno una versatilità limitata, vengono utilizzati principalmente per il DNA e sono meno efficaci con altri acidi nucleici come mRNA, siRNA e miRNA. 2. Mostrano un'elevata efficienza in specifici tipi di cellule, come le cellule HEK293, per il confezionamento del virus e l'espressione proteica, ma hanno prestazioni scadenti con cellule difficili da trasfettare. |
Reagente di trasfezione del fosfato di calcio | 1. I coprecipitati di DNA/fosfato di calcio si formano nel tampone HEPES con fosfato, dove la carica negativa del DNA si lega agli ioni calcio positivi. 2. Le cellule inglobano questi coprecipitati, che aderiscono alla loro superficie, attraverso l'endocitosi, un passaggio fondamentale per l'efficienza della trasfezione. 3. All'interno delle cellule, i coprecipitati rilasciano DNA, che può portare a un'espressione transitoria o a un'integrazione stabile nel genoma. | 1. La trasfezione del fosfato di calcio è conveniente e adatta ai laboratori con budget limitati. 2. È facile da eseguire: richiede semplici passaggi e competenze tecniche minime. 3. Può essere utilizzato sia per l'espressione proteica transitoria sia per la creazione di linee cellulari stabili. | 1. L'efficienza della trasfezione del fosfato di calcio è variabile e sensibile a fattori quali pH e purezza del DNA, che possono portare a trasfezioni fallite, soprattutto con DNA impuro. 2. Non è adatto a tutti i tipi di cellule, viene utilizzato principalmente per le cellule HEK293 ed è meno efficace per le cellule primarie e alcuni altri tipi di cellule. |
Yeasen Biotech, sfruttando le sue solide capacità di R&S e il team di tecnologia di produzione, ottimizza costantemente le formulazioni dei reagenti di trasfezione di DNA e RNA e migliora i processi di produzione. L'azienda ha lanciato una linea di prodotti diversificata basata su liposomi cationici e polimeri cationici per soddisfare le ampie esigenze di istituti di ricerca e aziende nel campo dei reagenti di trasfezione. Questi prodotti coprono varie applicazioni dei reagenti di trasfezione e presentano i seguenti vantaggi:
Ampia applicabilità: In grado di trasfettare in modo efficiente DNA plasmidico, siRNA, miRNA e mRNA.
Elevata efficienza di trasfezione: L'efficienza della trasfezione cellulare supera il 90%, soddisfacendo le esigenze di co-trasfezione di più plasmidi.
Verificato su più linee cellulari: Ha dimostrato una buona efficienza di trasfezione in oltre 40 diverse linee cellulari.
Ampia gamma di applicazioni: Utilizzato per la costruzione di linee cellulari stabili, l'espressione transitoria di proteine e il confezionamento di virus AAV e LV.
Alta frequenza di citazioni in letteratura: Citato in oltre 400 pubblicazioni di grande impatto, con un fattore di impatto totale superiore a 3000.
Come scegliere un reagente di trasfezione adatto alle tue esigenze
Considerati i requisiti specifici per l'efficienza della trasfezione e le condizioni nei diversi tipi di cellule e acidi nucleici (come DNA, mRNA, siRNA, ecc.), la selezione del reagente di trasfezione giusto è fondamentale per il successo dell'esperimento.In base alle esigenze specifiche dell'esperimento, scegli un reagente di trasfezione che possa ottimizzare l'efficienza di trasfezione e ridurre al minimo la citotossicità per garantire l'accuratezza dei dati sperimentali e la robustezza dei risultati sperimentali. YEASEN Biotech offre una gamma di prodotti ottimizzati per diversi scenari applicativi, assicurandoti di trovare il reagente di trasfezione più adatto per i tuoi scopi di ricerca e soddisfare le tue specifiche esigenze sperimentali.
Presentazione del caso

In un sistema di piastre a 6 pozzetti, i plasmidi che esprimono GFP sono stati trasfettati in cellule HEK293 utilizzando il reagente di trasfezione YEASEN 40802ES e il reagente di trasfezione di un concorrente. L'espressione di GFP nelle cellule trasfettate è stata osservata al microscopio 48 ore dopo la trasfezione. Le prestazioni del reagente di trasfezione YEASEN erano superiori.
In una piastra da 12 pozzetti, le cellule HEK293 sono state transfettate con un totale di 1 μg di DNA plasmidico; utilizzando 3 μL di reagente di transfettazione, è stato possibile co-transfettare con successo due plasmidi.
Caso del cliente
Convalidato su più linee cellulari, con una gamma più ampia di applicazioni.
Cellule | Cellule | Cellule | Cellule | Cellule |
293F | Caco2 | Modello HEK293T | LM3 | NIH-3T3 |
293T | CHO-K1 | HEK293 | Modello MCF10A | PC12 |
3t3 | COS-7 | CiaoLa | Il MCF-7 | Raw264.7 |
dalle 5 alle 8F | DF-1 | Epatite 3B | Codice MDA-MB-231 | RKO |
A549 | H520 | Epa1-6 | Meccanismo Energetico | SGC-7901 |
BV-2 | H9 | Epatite G2 | Modello MKN-28 | Numero di modello: SMCC7721 |
C2C12 | H9c2 | HUVEC | N2A | Vero |
C6 | HaCaT | Lenti X-293T | NCI-H1975 | HCT116 |
Modello WRL-68 | Il THP-1 | MDCK | Epatite C | Di più… |
Elenco prodotti
Numero di gatto | Nome del prodotto | Acido nucleico | Applicazione |
40802ES | Il DNA | Reagente di trasfezione liposomiale ad alte prestazioni | |
40804ES | Bassa tensione | Migliora la capacità di infezione lentivirale. | |
40806ES | siRNA, miRNA, ASO | Reagenti di trasfezione specifici per siRNA e miRNA con elevata efficienza di knockdown. | |
40808ES | DNA, siRNA, miRNA | Reagente di trasfezione liposomiale potenziato in grado di eseguire trasfezioni di DNA e RNA in vari tipi di cellule, continuando a mostrare buoni effetti sulle cellule difficili da trasfezionare. | |
40809ES | mRNA | Reagente di trasfezione specifico per mRNA con elevata efficienza di trasfezione in diversi tipi di cellule. | |
40815ES | Il DNA | Ampiamente applicabile per l'espressione proteica e il confezionamento virale (in polvere). | |
40816ES | Hieff Trans®Polietilenimmina lineare (PEI) MW40000(lisi rapida) | Il DNA | |
40820ES | Il DNA | Reagenti di trasfezione dedicati per il confezionamento virale, in grado di ottenere rese più elevate per il confezionamento virale AAV e LV | |
40821ES | Il DNA | ||
40823ES | Il DNA | La più alta efficienza di tranfezione. Particolarmente adatto per la produzione di AAV in coltura in sospensione, con rese più elevate. |
Citato in numerose pubblicazioni di grande impatto, garantendone la qualità (elenco parziale dei riferimenti citati)
- Liang X, Gong M, Wang Z, et al. Complessi LncRNA TubAR con TUBB4A e TUBA1A per promuovere l'assemblaggio dei microtubuli e mantenere la mielinizzazione. Cell Discov. 2024;10(1):54. Pubblicato il 21 maggio 2024. doi:10.1038/s41421-024-00667-y. SE=33.5(40808ES)
- Wang A, Chen C, Mei C, et al. La rilevazione immunitaria innata della disfunzione lisosomiale determina molteplici disturbi da accumulo lisosomiale. Nat Cell Biol. 2024;26(2):219-234. doi:10.1038/s41556-023-01339-x.SE=21.3(40802ES)
- Liu H, Zhen C, Xie J, et al. TFAM è un recettore dell'autofagia che limita l'infiammazione legandosi al DNA mitocondriale citoplasmatico. Nat Cell Biol. 2024;26(6):878-891. doi:10.1038/s41556-024-01419-6.SE=21.3(40802ES)
- Wang WW, Ji SY, Zhang W, et al. Progettazione basata sulla struttura del modulatore del recettore dell'apelina non ipertrofico. Cell. 2024;187(6):1460-1475.e20. doi:10.1016/j.cell.2024.02.004.SE=64,5(40802ES)
- Ke J, Pan J, Lin H, et al. Targeting Rab7-Rilp Mediated Microlipophagy Alleviates Lipid Toxicity in Diabetic Cardiomyopathy. Adv Sci (Weinh). Pubblicato online il 5 giugno 2024. doi:10.1002/advs.202401676.SE=15.1(40806ES)
- Jiang L, Xie X, Su N, et al. Large Stokes shift fluorescent RNAs per imaging a doppia emissione di fluorescenza e bioluminescenza in cellule vive. Nat Methods. 2023;20(10):1563-1572. doi:10.1038/s41592-023-01997-7.SE=48(40802)
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- Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. Una fosfolipide fosfatasi batterica inibisce la piroptosi dell'ospite dirottando l'ubiquitina. Science. 2022;378(6616):eabq0132. doi:10.1126/science.abq0132.SE=63.714(40802ES)
- Liu R, Yang J, Yao J, et al. Controllo optogenetico della funzione e del metabolismo dell'RNA mediante proteine leganti l'RNA commutabili dalla luce ingegnerizzate. Nat Biotechnol. 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1.SE=54,908(40802ES)
- Chen S, Chen G, Xu F, et al. Trattamento dell'asma allergico eosinofilo mediante cellule T recettoriali antigeniche chimeriche ancorate a IL-5 ingegnerizzate. Cell Discov. 2022;8(1):80. Pubblicato il 16 agosto 2022. doi:10.1038/s41421-022-00433-y.SE=38.079(40804ES)