Kapitel 1: PCR-Technologie
1.1 Prinzipien der PCR
PCR (Polymerase Chain Reaction) oder Polymerase-Kettenreaktion bezeichnet die DNA-Polymerase katalysiert durch den Stammstrang der DNA als Vorlage, mit einem spezifische Grundierung zur Erweiterung des Startpunktes, der Zugabe von dNTP, Mg2+ Und Verlängerungsfaktoren, Verstärkungssteigerung Faktoren. Durch Denaturierung, Annealing und Verlängerungsschritte Die In-vitro-Replikation des Tochterstrangs ist komplementär zur DNA-Vorlage des Elternstrangs, wodurch jede Ziel-DNA in vitro schnell und spezifisch amplifiziert werden kann.
1.2 Klassifizierung von DNA-Polymerasen
DNA pol ist ein wichtiges Enzym für Zellular Replikation von DNA. Je nach thermischer Stabilität, Synthesefähigkeit, Geschwindigkeit, Genauigkeit und Spezifität, kann als Taq-DNA-Polymerase, High-Fidelity-DNA-Polymerase, Hot-Start-DNA-Polymerase, Direktexpansions-DNA-Polymerase, langfragmentierte DNA-Polymerase klassifiziert werden Enzym, schnelle DNA-Polymerase, multiple DNA-Polymerase und so weiter.
Die häufigste davon ist die Taq DNA-Polymerase, die Polymeraseaktivität am 5'→3'-Ende aufweist und Exonuklease-Aktivität am 5'→3'-Ende, aber nein 3'→5'-Endkorrekturaktivität. Das wichtigste Merkmal von Taq ist seine gute Hitzebeständigkeit, die der thermischen Denaturierung standhält Schritt der PCR, wodurch es unnötig wird, mitten im Prozess weiteres Enzym hinzuzufügen. Taq hat jedoch eine geringe Wiedergabetreue, da es keine Korrekturleseaktivität hat. Seine Wiedergabetreue wird hauptsächlich durch die Konzentration und das Verhältnis von Magnesiumionen und dNTPs erreicht.
Die hochpräzise DNA-Polymerase enthält ein Polymerisationszentrum und ein Spaltungszentrum. Das Polymerisationszentrum hat eine 5'→3'-DNA-Polymeraseaktivität, die katalysieren kann die Synthese von DNA entlang der Richtung 5'→3'; das Spaltzentrum hat eine 3'→5'-Exonukleaseaktivität, die die Reparatur von Basenfehlpaarungen durchführen kann. Daher hat die hochpräzise DNA-Polymerase zusätzlich zu den Eigenschaften der Taq-DNA-Polymerase auch eine korrigierende Aktivität, die verantwortlich ist für Herausschneiden die nicht übereinstimmenden Nukleotide, wodurch die Genauigkeit des Produkts gewährleistet wird.
Das obige Diagramm zeigt, wie die DNA-Polymerase funktioniert [1].
Direkte PCR (Direkte PCR) ist eine Reaktion, die verwendet ungereinigte Proben für die PCR-Amplifikation und Tier oder Pflanzengewebe zur direkten Amplifikation. Momentan,
Die obige Abbildung zeigt die direkte PCR-Technik.
A. Direkte Methode: Nehmen Sie eine kleine Menge Probe und geben Sie diese direkt in die PCR Master Mix zur PCR-Identifizierung;
B. Lysemethode: Nach der Probenentnahme geben Sie die Probe zur Lyse-Lösung hinzu, um das Genom freizugeben. Nehmen Sie eine kleine Menge des Lyse-Überstands und geben Sie ihn zur PCR-Identifizierung zum PCR-Master-Mix hinzu.
1.3 Häufig gestellte Fragen und Lösungen
| Problem | Grund | Lösung |
| Ohne verstärkte Bänder | Probleme mit dem Elektrophoresesystem | Beheben Sie Probleme mit Nukleinsäurefarbstoff, Gelkonzentration und Elektrophoresepuffer. |
| Ungenaue Denaturierungstemperatur | Stimmt die angezeigte Temperatur des PCR-Geräts mit der tatsächlichen Temperatur überein? Wenn die Temperatur zu hoch ist, wird das Enzym schnell in den ersten Zyklen; ist er zu niedrig, ist die Denaturierung der Vorlage nicht vollständig. | |
| Kontamination von Proteasen und Nukleasen im Reaktionssystem | Das Reaktionssystem sollte vor der Zugabe des Taq-Enzyms 5–10 Minuten lang auf 95 °C erhitzt werden. | |
| PRimer-Fehler | Überprüfen Sie die Primerspezifität oder entwerfen Sie Primer mit BLAST neu. | |
| Vorlage enthält Verunreinigungen | Insbesondere mit Formaldehyd fixierte und in Paraffin eingebettete Gewebe enthalten häufig Ameisensäure, die zur Depurinierung der DNA führt und die PCR-Ergebnisse beeinträchtigt. | |
| Verschlechterung und Ausfall der Grundierung | Stellen Sie sicher, dass die synthetischen Primer korrekt oder gereinigt bzw. aufgrund unsachgemäßer Lagerbedingungen inaktiviert sind. | |
| Geringere Menge an PCR-Produkt | Ungeeignete Glühtemperatur | Zur Optimierung der Annealingtemperatur wurde eine Gradienten-PCR-Reaktion mit einem Gradienten von 2 Grad entwickelt. |
| Vorhandensein von Inhibitoren in der DNA-Vorlage | Stellen Sie sicher, dass die DNA-Vorlage sauber ist. | |
| Längere Denaturierung | Eine längere Denaturierung führt zur Inaktivierung der DNA-Polymerase. | |
| Verlängerung zu kurz | Die Verlängerungszeit ist zu kurz. Stellen Sie die Verlängerungszeit nach dem Prinzip 1 kb/min ein. | |
| Menge der DNA-Vorlage zu gering | Erhöhen Sie die Menge der DNA-Vorlage. | |
| Unzureichende Menge an Primern | Erhöhen Sie den Primergehalt im System. | |
| Unzureichende Anzahl an PCR-Zyklen | Erhöhen Sie die Anzahl der Reaktionszyklen. | |
| Mehrere Bänder | Schlechte Primer-Spezifität | Um die Primerspezifität zu prüfen oder Primer neu zu gestalten, wurde Primer-Design-Software wie BLAST und Primer verwendet. |
| Zu viele Schleifen | Erhöhen Sie die Vorlagenmenge entsprechend und reduzieren Sie die Anzahl der Zyklen. | |
| Exogene DNA-Kontamination | Auf sauberen Betrieb achten. | |
| Übermäßige Anzahl an Vorlagen | Die Menge an Plasmid-DNA sollte <50 ng betragen, während die Menge an genomischer DNA <200 ng betragen sollte. | |
| Zu viel Grundierung | Reduzieren Sie die Menge der Primer im Reaktionssystem. | |
| Die Reaktionslösung ist nicht gut gemischt | Stellen Sie sicher, dass der Reaktionspuffer vollständig geschmolzen und gründlich gemischt ist. | |
| Mg Hohe Konzentration | Passen Sie die verwendete Mg-Konzentration entsprechend an. | |
| Hohe Enzymdosierung oder schlechte Enzymqualität | Reduzieren Sie die Enzymmenge oder ersetzen Sie es durch eine andere Quelle. | |
| Niedrige Glühtemperatur, lange Glüh- und Verlängerungszeit | Erhöhen Sie die Annealingtemperatur, um die Denaturierungs- und Verlängerungszeit zu verkürzen, oder entwerfen Sie eine Gradienten-PCR-Reaktion, um die Annealingtemperatur zu optimieren. | |
| Probleme mit dem PCR-Mix selbst | Handelt es sich um eine PCR-Vormischung, liegt dies möglicherweise an der Qualität des Reagenzes selbst. Es empfiehlt sich, die Charge zu wechseln oder auf eine andere Marke zurückzugreifen. | |
| Falsche Größe | CKontamination | Reinigen Sie die Werkbank mit neuen Reagenzien und Spitzen. |
| Falsche Verwendung von Vorlagen oder Primern | Primer und Vorlagen ersetzen. | |
| GEnotyp | An den untersuchten Genen wurden Sequenzanalysen und BLAST-Studien durchgeführt. |
Kapitel 2: Nukleinsäureelektrophorese
2.1 Prinzipien der Nukleinsäureelektrophorese
Die Bewegung geladener Teilchen unter Einwirkung eines elektrischen Feldes in Richtung einer Elektrode, die ihren elektrischen Eigenschaften entgegengesetzt ist, wird als Elektrophorese bezeichnet. Unter Verwendung der geladenen Teilchen im elektrischen Feld bewegen sich mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten und erreichen Trennung der Technologie heißt Elektrophorese. Nukleinsäure-Elektrophorese ist eine wichtiges Werkzeug für die Nukleinsäureforschung und ist ein integraler Bestandteil von Techniken wie Nukleinsäuresonden, Nukleinsäureamplifikation und Sequenzanalyse. Die Nukleinsäureelektrophorese ist in der Regel durchgeführt in Agarose oder Polyacrylamidgele. Verschiedene Konzentrationen von Agarose und Polyacrylamid können Gele mit unterschiedlichen Molekularsiebmaschenweiten bilden, die zur Trennung von Nukleinsäurefragmenten mit unterschiedlichem Molekulargewicht verwendet werden können.
2.2 Agarosegelelektrophorese
Agarose ist ein lineares Polymer, das aus Meeresalgen gewonnen wird. Agarose wird in einer Pufferlösung erhitzt und zu einem klaren, transparenten Sol geschmolzen, das dann gegossen wird in eine Gelatineform und verfestigt sich zu einer festen Matrix, einem sogenannten Gel. Die Dichte hängt ab von die Konzentration der Agarose.
Agarose Gelelektrophorese ist eine Art Elektrophoresemethode mit Agarose als Trägermedium und der Hauptunterschied zwischen dem analytisch Prinzip und andere Unterstützung Elektrophorese ist, dass es die Doppelrolle von "Molekularsieb" und "Elektrophorese". Die Das Gel wird in die elektrisches Feld, unter die Aktion der elektrisches Feld, die geladene Nukleinsäuren wandern in die positiv Pole durch das Mesh von Die Gel. Der Rate der Die Migration wird beeinflusst durch die Größe Nukleinsäuremoleküle, Agarosekonzentration, angelegte Spannung, elektrisches Feld, Elektrophoresepuffer und Menge des eingebetteten Farbstoffs. Nach entsprechender Zeit der ElektrophoreseSIst unter unterschiedliche Bedingungen, Nukleinsäurefragmente mit unterschiedlicher Größe und Konformation befinden sich an verschiedenen Positionen auf dem Gel, wodurch der Zweck der Trennung erreicht wird.Die Trennung von Agarosegel hat ein breites Spektrum, häufig verwendet in DNA schneiden Gel Recovery, DNA-Isolierung und verwendet, um zu unterstützen, ob die DNA rekombinant ist, Plasmid usw. Unabhängig davon, ob das Plasmid geschnitten ist oder nicht, unterschiedliche Konzentrationen von Agarosegel kann von der Länge des 200 Basispunkte Zu 50 KB von DNA Fragmente.
2.3 Experimentelle Methoden
Herstellung Kleber
Nehmen wir eine Konzentration von 1 % als Beispiel: 1 g Agarose abwiegen, in einen 250 ml Erlenmeyerkolben gießen, 100 ml 0,5×TBE Elektrophoresepuffer hinzufügen und gut vermischen, in der Mikrowelle kochen und dann Lassen Sie es bei etwa 60 °C lufttrocknen, geben Sie eine entsprechende Menge Nukleinsäurefarbstoff hinzu, schütteln Sie es gut und gießen Sie es dann in eine saubere, bereits vorbereitete Gelplatte. Nehmen Sie einen Kamm mit beiden Händen, um senkrecht in die Gellösung einführen und warten, bis Gel zu sein Natürlich abkühlen lassen, bis es völlig erstarrt ist (25-30 Min.).
Entfernen Sie den Kleberkamm
Übertragen Sie das Gel vorsichtig in den Elektrophoresebehälter (entweder mit der Gelschale oder nur dem Gel), Platzieren Sie die Probenvertiefung mit der Seite am Minuspol und fügen Sie 0,5× TBE hinzu Elektrophoresepuffer, bis das Gel etwa 1 mm darunter steht.
Hinzufügen Probe
10× Ladepuffer hinzufügen (Ladepuffer Puffer) zu den DNA-Proben, gut mischen und dann langsam die Probenmischung in den Su gebenBverschmolzenes Gel Brunnen mit einer Pipettierpistole, wobei 5-10 μL Probe pro Vertiefung hinzugefügt werden (nicht mehr als 40 μL). Im Allgemeinen sollte die erste Vertiefung mit DNA-Marker gefüllt werden, die zweite mit positiver Kontrolle (definierte DNA), Und die dritte mit Negativkontrolle (Reagenz oder Wasser), Und Die Reihenfolge der Proben sollte aufgezeichnet werden.
Elektrophorese
Bedecken Sie die Elektrophoresetank, verbinden Sie die Drähte, schalten Sie das Gerät ein und stellen Sie die Elektrophoresespannung, den Strom und Zeit Parameter. Im Allgemeinen Die Spannung sollte 5 V/cm nicht überschreiten (die Länge bezieht sich auf der Abstand zwischen Plus- und Minuspol der Elektrophoresewanne), Und Die Elektrophoresezeit beträgt im Allgemeinen 15-30 Minuten.
Ende der Elektrophorese
Entfernen Die Gel (ohne Gelschale) und bilden es unter dem UV-Bildgebungssystem ab, um ein klares elektrophoretisches Bild zu erhalten. Bearbeiten Sie dann das elektrophoretische Bild mit der Bildbearbeitungssoftware und Beschriften Sie es mit den Probeninformationen, dem Datum und dem Bediener.
2.4 Häufig gestellte Fragen und Lösungen
| Problem | Grund | Lösung |
| Fehlendes Zielband | Kleiner DNA geht das Gel aus | Verkürzen Sie die Elektrophoresezeit, reduzieren Sie die Spannung, erhöhen Sie die Gelkonzentration. |
| DNA-Banden mit ähnlicher Molekulargewichtsgröße lassen sich nicht leicht unterscheiden | Erhöhen Sie die Elektrophoresezeit, um die optimale Gelkonzentration zu erreichen. | |
| Das Zielfragment ist zu groß für die herkömmliche Elektrophorese. | Analysiert mittels gepulster Gelelektrophorese. | |
| Kein Zweck-Clip | Der PCR-Prozess war fehlerhaft und amplifizierte das Zielprodukt nicht. | |
| Verschwommene DNA-Banden | Abgestandener Elektrophoresepuffer | Bei häufiger Verwendung des Elektrophoresepuffers verringert sich die Ionenstärke, der pH-Wert steigt langsam an und die Spülfähigkeit lässt nach, was sich wiederum auf die Wirkung der Elektrophorese auswirkt. Es wird daher empfohlen, den Elektrophoresepuffer häufig zu wechseln. |
| DNA-Abbau | Vermeiden Sie eine Kontamination mit Nukleasen. | |
| Die verwendeten Elektrophoresebedingungen sind für die Elektrophorese nicht geeignet | Die Elektrophoresespannung sollte 20 V/cm nicht überschreiten und die Temperatur sollte < 30 °C betragen. Die Temperatur bei der Elektrophorese großer DNA-Stränge sollte < 15 °C betragen. Prüfen Sie, ob der verwendete Elektrophoresepuffer über ausreichende Pufferkapazität verfügt. | |
| Übermäßige DNA-Probenentnahme | Reduzieren Sie die Menge der im Gel aufgesammelten DNA. | |
| DNA-Proben sind zu salzig | Überschüssiges Salz wurde vor der Elektrophorese durch Ethanolfällung entfernt. | |
| Proteinkontamination | Durch Phenolextraktion vor der Elektrophorese werden Proteine entfernt. | |
| Probenkonzentration zu hoch | Die Konzentration der oberen Probe sollte weniger als 500 ng/Vertiefung betragen. Eine zu hohe Konzentration beeinträchtigt die Geschwindigkeit der Elektrophorese und führt zu Verzögerungen und Unschärfe. | |
| Schwache oder keine Bands | Unzureichende DNA-Probengröße | Erhöhung der DNA-Aufnahmemenge |
| DNA-Abbau | Vermeidung einer Nuklease-Kontamination der DNA | |
| Ungeeignete Lichtquelle für Nukleinsäurefarbstoffe | Wählen Sie die Lichtquelle mit der geeigneten Wellenlänge gemäß den Anweisungen für den Nukleinsäurefarbstoff aus. | |
| Bänder nicht getrennt | Zeitmangel | Erhöhen Sie die Elektrophoresezeit |
| Falsche Gelkonzentration | Die Klebstoffkonzentration ist zu hoch, wodurch der Trennwiderstand zu groß wird. | |
| Die Konzentration der Salzionen in der Probe ist zu hoch | Eine hohe Konzentration an Salzionen erhöht den elektrophoretischen Widerstand und verhindert die Trennung von Bändern, z. B. bei verdauten Proben, die Endonukleasepuffer enthalten. | |
| Unspezifische Banden | RNA-Kontamination | Erneute Probenaufbereitung |
| Kontamination zwischen Proben | Austausch der Spitze während des Befüllens; Vermeidung des Verschüttens von Proben mit Volumina >40 μl. |
2.5 Polyacrylamid-Gelelektrophorese
Polyacrylamidgele entstehen durch die chemische Reaktion zwischen Acrylamidmonomer, Kettenpolymerisationskatalysatoren N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin (TEMED) und Ammoniumpersulfat sowie dem Vernetzer N,N'-Methylenbisacrylamid. Das Acrylamidmonomer polymerisiert in Gegenwart eines Katalysators zu langen Ketten, die vernetzt von ein Vernetzungsmittel zu einem Gel, dessen Porengröße durch die Kettenlänge und den Grad der Vernetzung bestimmt wird. Die Porengröße wird durch die Kettenlänge bestimmt und der Grad der Vernetzung. Die Kettenlänge hängt ab von Die Konzentration von Acrylamid und der Grad der Vernetzung des Polymers können durch Anpassen des Verhältnisses von Acrylamid zu Vernetzungsmittel verändert werden..
Mithilfe der Polyacrylamid-Gelelektrophorese können separate Proben basierend auf Unterschiede in Aufladung, Molekülgröße und Form von die elektrophoretisch untersuchten ProbenEs kombiniert Molekularsiebung und elektrostatische und hat eine höhere Auflösung als die Agarosegelelektrophorese. DNA-Fragmente unterscheidet sich nur durch ein Nukleotid kann getrennt werden.
Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese wird zur Analyse und Präparation von DNA-Fragmenten mit einer Länge von weniger als 1 kb verwendet. Abhängig von die Größe von die zu isolierenden Nukleinsäurefragmente, Gele von anders kann zubereitet werden.
Die effektiven Trennbereiche für verschiedene Konzentrationen von Acrylamid und DNA sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:
| Konz. (%) | Effektiver Trennbereich (bp) |
| 3.5 | 100 bis 2000 |
| 5 | 80 bis 500 |
| 8 | 60 bis 400 |
| 12 | 40 bis 200 |
| 15 | 25 bis 150 |
| 20 | 10 bis 100 |
2.4 Richtlinien für die Auswahl verwandter Produkte
Konventionelle PCR | ||||
| Spezifikation | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Verstärkungslänge | ≤10-15 kb | ≤5 KB | ≤5 KB | ≤4 KB |
| Verlängerungszeit | 1–10 Sek./KB | 30 Sek./KB | 30 Sek./KB | 30 Sek./KB |
| Produkt-Endstruktur | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Glühtemperatur | 60℃ | Temperatur: (2 bis 5) °C. | Temperatur: (2 bis 5) °C. | Temperatur: (2 bis 5) °C. |
| GC-Kompatibilitätsbereich | 30-70 % | 40-70 % | 40-70 % | 30-70 % |
| 5'-3' Exonuklease-Aktivität | Gegenwärtig | Gegenwärtig | Gegenwärtig | Gegenwärtig |
| Kolonie-PCR | Geeignet | Geeignet | Geeignet | Geeignet |
| Genidentifizierung | Geeignet | Geeignet | Geeignet | Geeignet |
| Multiplex-PCR | Nicht geeignet | Nicht geeignet | Nicht geeignet | 3-4 plexe PCR |
| Elektrophorese-Indikator | Lila-rot | Blau | Farblos | Blau |
| Heißstart | Heißstart | Kein Warmstart | Kein Warmstart | Heißstart |
| Vormischung/Kit | Vormischung | Vormischung | Vormischung | Vormischung |
Direkte PCR | ||||
| Spezifikation | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Produkttyp | Direkte Amplifikation an der Maus | Direkte Blutverstärkung | Direkte Amplifikation von Pflanzen | |
| Verstärkungslänge | ≤1 KB | ≤8 KB | ≤1 KB | |
| Verlängerungszeit | 30 Sek./KB | 3-5 s/kb für ≤2 kb, | 60 Sek./KB | |
| 10 s/kb für ≤8 kb | ||||
| Lysezeit der Probe | 15 Minuten | 0-3 Minuten | 0-10 Minuten | |
| Produkt-Endstruktur | Stumpfes Ende | Stumpfes Ende | Stumpfes Ende | |
| Glühtemperatur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| GC-Kompatibilitätsbereich | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % | |
| 5'-3' Exonuklease-Aktivität | √ | √ | √ | |
| Genidentifizierung | √ | √ | √ | |
| Multiplex-PCR | 3-4 plex | |||
| Direkte Probenverstärkung | √ | √ | √ | |
| Elektrophorese-Indikator | Blau | Farblos | Blau | |
| Heißstart | √ | √ | √ | |
| Vormischung/Kit | Kit (mit Mix) | Kit (mit Mix + Puffer) | Kit (mit Mix) | |
| Geeignete Organismen | Maus, Ratte | Mensch, Maus, Ziege, Huhn, Schwein usw. | Reis, Mais, Tabak, Raps, Weizen, Sojabohnen usw. | |
| Geeignetes Gewebe/Material | Schwanz, Ohr, Zehe (mit Muskel) und andere Organe | Frischblut mit EDTA, Heparin, Citrat usw., gekühltes (gefrorenes) Blut, kommerzielle Trockenblutproben | Junge Blätter, alte Blätter, Sämlinge, junge Stängel | |
| Beispieleingabe | Gewebe: 5-10 mg; Schwanz: 1-5 mm | Vollblut: 0,5 % - 20 %, Trockenblutfleck: 1 mm² | Blatt: 1-10 mm, Samen: 1-3 mm | |
Hochpräzise PCR | ||||
| Spezifikation | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Verstärkungslänge | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | |
| Verlängerungszeit | 5 Sek./KB | 30 Sek./KB | 30 Sek./KB | |
| Treue (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Produkt-Endstruktur | Stumpfes Ende | Stumpfes Ende | Stumpfes Ende | |
| Glühtemperatur | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| GC-Kompatibilitätsbereich | 20 – 80 % | 30-60 % | 30-60 % | |
| 5'-3' Exonuklease-Aktivität | Abwesend | Abwesend | Abwesend | |
| Elektrophorese-Indikator | Blau | Farblos | Blau | |
| Einzelenzym/Vormischung | Vormischung | Einzelnes Enzym | Vormischung | |
| Toleranz | / | / | Blut, Mausgewebelysat | |
Nukleinsäure-Elektrophorese | ||||
| Produktkategorie | Katzen-Nr. | Produktname | Anwendung | |
| Agarose | 10208ES | Agarose | Routinemäßige Nukleinsäureelektrophorese | |
| 10221ES | Hochsiebbare Agarose (PCR-Qualität) | Geeignet zur Trennung von DNA-Fragmenten von 20 bp–800 bp, vergleichbar mit Polyacrylamidgel | ||
| 10226ES | Agarose-Tabletten (0.5 g/Tablette) | Praktisch für routinemäßige Agarose-Anwendungen | ||
| Nukleinsäurefarbstoff | 10202ES | YeaRed Nukleinsäure-Gelfärbung (10.000-fach in Wasser) | Wasserlöslich, mit spektralen Eigenschaften ähnlich wie EB, anregbar bei 300 nm UV-Licht | |
| DNA-Marker | 10510ES | GoldBand 1 kb DNA-Leiter | 250-12000 bp (13 Bänder) | |
| 10515ES | GoldBand 50 bp DNA-Leiter | 50-1000 bp (14 Bänder) | ||
| 10507ES | GoldBand 100bp DNA-Leiter | 100–1500 bp (12 Bänder) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp plus DNA-Leiter | 100–3000 bp (14 Bänder) | ||
| 10517ES | GoldBand 200 bp DNA-Leiter | 200–5000 bp (12 Bänder) | ||
| 10518ES | GoldBand 500 bp DNA-Leiter | 500-5000 bp (8 Bänder) | ||
| 10501ES | GoldBand DL2000 DNA-Marker | 100-2000 bp (6 Bänder) | ||
| 10504ES | GoldBand DL5000 DNA-Marker | 100-5000 bp (9 Bänder) | ||
| 10505ES | GoldBand DL10.000 DNA-Marker | 100–10.000 bp (10 Bänder) | ||
| 10511ES | GoldBand DNA-Leiter in voller Größe | 100-12000 bp (20 Bänder) | ||
| 10512ES | GoldBand DL15000 DNA-Marker | 250-15000 bp (7 Bänder) |
2.5 Publikationen unter Verwendung von Nukleinsäureelektrophoreseprodukten (Partial)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI ist ein Kolon-Krypt-Rezeptor für TcdB aus dem hypervirulenten Klade 2 von C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, ein neuartiges Genexpressionssystem mit stressbedingtem Wasserstoffperoxid ide Eliminationseigenschaft und Anti-Aging-Effekt. Signaltransduktion und zielgerichtete Therapie. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (WENN: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Mikropeptid-PACMP-Hemmung führt zu synthetischen Letaleffekten durch Senkung des CtIP und Poly(ADP-Ribosilierung). mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:17,970)
[4] Zhu M, DaiX. Wachstumshemmung durch veränderte (p)ppGpp-Spiegel resultiert aus nicht-optimalen Ressourcenzuweisung in Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identifikation von Pilzpathogenen zur Kontrolle nach der Ernte Zerfall der Passionsfrucht (Passiflora edulis) und vergleichende Multi-Omics-Pfadanalyse zeigen Lila ist widerstandsfähiger nt gegenüber Krankheitserregern als eine gelbe Sorte. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Veröffentlicht am 19. Oktober 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (IF:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Strukturelle Charakterisierung einer Neutralisierender Nanobody mit breiter Wirkung gegen SARS-CoV-2-Varianten. Front Microbiol. 2022;13:875840. Veröffentlicht am 2. Juni 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (WENN:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 ist essentiell für die Melaninbiosynthese und Pathogenität von Colletotrichum gloeosporioides. pathogens. 2020;9(2) :141. veröffentlicht am 20. Februar 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. veröffentlicht am 20. Februar 2020. doi:10.3390/pathogens9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. CircRNA-Expressionsprofile bei Deltamethrin-empfindlichen und -resistenten
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (WENN:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Wachstumsunterdrückung durch verändertes (p) ppGpp Ebenen resultieren aus einer nicht optimalen Ressourcenzuweisung in Escherichia coli[J]. Nucleic acid research, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. Selenocystein-spezifische Massenspektrometrie offenbart gewebespezifische Selenopro teome und Kandidatenselenoproteine[J ]. Zellchemische biology, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Veröffentlichungen unter Verwendung von PCR-Produkten (teilweise)
[1] Wang Y, Fu Z, LiX, und alle. Zytoplasmatisch DNA-Erkennung von KU Komplex In gealtert CD4+ T Zelle verstärkt T Zelle aktiva tion Und altersbedingt Autoimmun Entzündung. Immunität. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, und alle. "Stern" miR-34a Und CXCR4 Antagonist basierend nanoplex für binarj Kooperative Migrationsbehandlung gegenT metastasiert Brust Krebs. J Kontrolle Veröffentlichung. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] QiaoY, Du J, Ge R, und al. A Probe Und Erkennung Mikronadel Pflaster für Schuppenflechte MikroRNA Biomarker
Analyse In Interstitielle Flüssigkeit. Anal Chem. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lin F, Ja X, Huang Z, und alle. Graphen Oxidbasiert Unterdrückung von Unspezifität In Schleifenvermittelt Isother malAmplifikation Sensibles aktivieren Erkennung von Cyclooxygenase-2 mRNA In Kolorektaler Darm Krebs. Anal Chem. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lin Q, Huang Z, Ja X, und alle. Labor In A Rohr: Isolierung, Extraktion, Und IstSonstiges Verstärkung Erkennung von exosomal lang nichtcodierend RNA des Magens Krebs. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, und al. 5-Formyluracil als A MehrfarbigFunktionalität Gebäude Block In Biosensor Designs[J]. Angew Chemie Int Ed Engl. 2018 Jul 26;57(31):9689-9693.（IF 11.992）
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, und alle. Funktionsgewinn MutatIon von Card14 Führt zu Spontan Psoriasis-ähnlich Haut Entzündung durch Erweitert Keratinozyten Antwort auf IL-17A. Immunität. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
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Zitat:
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